目的:單純皰疹病毒性角膜炎（herpes simplex keratitis,HSK）是由I型單純皰疹病毒（herpes simplex virus,HSV-1）感染引起的嚴(yán)重致盲性眼病,是當(dāng)今世界患病率最高的感染性角膜疾病。在美國每年約有59萬新發(fā)病例,近年的發(fā)病率約為11.8/10～5;在我國人群中HSK的患病率約為11/10～4。HSK主要表現(xiàn)為角膜神經(jīng)退行、新生血管、炎癥反應(yīng)等,可導(dǎo)致角膜瘢痕化甚至失明,最終需要角膜移植手術(shù)才能重獲光明。目前HSK的治療主要依賴于核苷類似物抗病毒藥物,例如更昔洛韋和阿昔洛韋等,缺乏有效緩解角膜癥狀的藥物。色素上皮細(xì)胞衍生因子（pigment epithelium derived factor,PEDF）具有神經(jīng)營養(yǎng)作用,還具有很強(qiáng)的抑制血管形成作用,已在脈絡(luò)膜新生血管形成及糖尿病相關(guān)眼病等方面得到證實。血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）是神經(jīng)元分泌的可與免疫系統(tǒng)雙向溝通的內(nèi)源宿主防御蛋白,能夠參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。然而兩者在HSK中的表達(dá)及作用尚無研究報道,具有廣闊的研究前景。本研究通過構(gòu)建小鼠HSK模...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1 小鼠HSK模型各時間點(diǎn)角膜臨床癥狀及神經(jīng)退行、血管新生情況

為了評價HSV-1感染后角膜新生血管的變化,使用CD31抗體對角膜血管進(jìn)行免疫熒光染色。全角膜血管免疫熒光染色結(jié)果顯示,感染第3天可見角膜緣新生血管芽生成,第7天可見大量新生血管向角膜中央生長,15天時新生血管逐漸萎縮消退,至45天可見新生血管基本退行消失(圖1C)。新生血管面積....

圖2 空斑試驗檢測HSV-1病毒感染后各時間點(diǎn)角膜病毒載量

為評價小鼠HSK模型各時間點(diǎn)病毒含量的變化,我們?nèi)〔《靖腥竞?、7、15、45天,應(yīng)用空斑試驗進(jìn)行病毒定量分析,結(jié)果顯示,HSV-1感染后第3天病毒量最高,大約為40pfu/ml,第7天、15天、45天病毒量顯著下降,且肉眼不能辨別空斑,均不能達(dá)到檢出標(biāo)準(zhǔn)(圖2)。5小鼠HS....

圖4 HSV-1病毒感染后小鼠角膜VIP表達(dá)變化

為觀察VIP在小鼠HSK模型角膜中的表達(dá),取正常角膜和HSV-1感染后第3、7、15、45天小鼠角膜進(jìn)行相關(guān)檢測。冰凍切片VIP免疫熒光染色結(jié)果顯示,正常角膜中VIP僅有少量表達(dá),病毒感染后第3天熒光顯著增強(qiáng),第7天熒光減弱,第15天熒光再次增強(qiáng),第45天降至接近正常水平(圖4A....

圖5 外源性PEDF對小鼠HSK的治療作用

為了探討PEDF對免疫應(yīng)答和促炎因子表達(dá)的影響,收取正常角膜、PBS對照組和PEDF處理組的HSK小鼠角膜,進(jìn)行免疫熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)和ELISA檢測分析PEDF對角膜的影響。PEDF對角膜免疫應(yīng)答的影響在病程第7天較第3天更明顯,因此選取第7天角膜作為研究對象。免疫熒光染色結(jié)....

本文編號：4048410