紫外線輻射是人類皮膚癌發(fā)生的主要誘導(dǎo)因素,大約65%的黑色素瘤和90%的非黑色素瘤皮膚癌的發(fā)生與紫外線照射有關(guān)。長期UVB暴露會引起皮膚細(xì)胞的DNA發(fā)生損傷,如果得不到及時正確的修復(fù),這些損傷的DNA會大量積累并逐漸演變?yōu)榛蛲蛔兊漠a(chǎn)生。這些基因突變會引起細(xì)胞內(nèi)蛋白的表達(dá)異常及信號通路的激活,進(jìn)而促使皮膚癌的發(fā)生。在UVB輻射處理的角質(zhì)細(xì)胞和一些黑色素瘤細(xì)胞株中,冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白（CIRP）呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)的情況,提示CIRP與皮膚癌發(fā)生之間可能存在密切關(guān)系。CIRP是冷休克蛋白家族成員之一,響應(yīng)亞低溫條件誘導(dǎo)表達(dá)。作為一個應(yīng)激調(diào)控蛋白,CIRP參與調(diào)控大量細(xì)胞生理進(jìn)程,比如生長,衰老,凋亡以及癌癥發(fā)生等。我們課題組前期發(fā)現(xiàn)CIRP可以引起信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（Stat3）的磷酸化表達(dá)上調(diào),促使HaCaT角質(zhì)細(xì)胞在響應(yīng)UVB輻射處理情況下的細(xì)胞增殖和存活。CIRP與p-Stat3之間的這種正相關(guān)表達(dá)關(guān)系在肝臟細(xì)胞中也被報道。但在UVB輻射下的HaCaT角質(zhì)細(xì)胞中,CIRP是如何調(diào)控Stat3的具體作用機(jī)制未曾闡述清楚。Jaks是存在于胞內(nèi)的無受體的酪氨酸激酶,可介導(dǎo)多種細(xì)胞因子的信號...

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.3細(xì)胞內(nèi)CIRP對于應(yīng)激的反應(yīng)及其調(diào)控作用[47]

CIRP主要定位在細(xì)胞核中,受應(yīng)激調(diào)控,CIRP可以從核定位轉(zhuǎn)移至細(xì)胞質(zhì)中去。CIRP的核質(zhì)定位轉(zhuǎn)化受其蛋白質(zhì)C端的調(diào)節(jié)以及甲基化作用的調(diào)控[62][63]。CIRP的核質(zhì)定位轉(zhuǎn)變可以受到UV輻射,組織缺氧,滲透壓休克和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等誘導(dǎo)[63][64][58][65]。大部分應(yīng)激....

圖6.1 siRNA轉(zhuǎn)染的A375細(xì)胞中相應(yīng)基因的表達(dá)水平(n=3;*,P<0.05,**,P<0.01)

結(jié)果如圖6.1所示:靶向于CIRP的siRNA可以抑制CIRP在A375黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)。由于CIRP在A375細(xì)胞株中呈現(xiàn)高表達(dá)的情況,siRNA并未完全抑制CIRP的表達(dá)量,只是引起CIRP表達(dá)量的下調(diào),但并不影響后續(xù)實驗研究。我們發(fā)現(xiàn)隨著CIRP的表達(dá)量下調(diào),一些與細(xì)....

圖6.2抑制CIRP基因?qū)375細(xì)胞增殖能力的影響(n=3;*,P<0.05,**,P<0.01)

我們課題組前期的數(shù)據(jù)表明[103],HaCaT細(xì)胞中CIRP基因的過表達(dá)能夠促進(jìn)HaCaT角質(zhì)細(xì)胞的增殖,慢性低劑量UVB輻射誘導(dǎo)產(chǎn)生的HaCaTt細(xì)胞增殖率也明顯大于HaCaT細(xì)胞,表明CIRP與細(xì)胞增殖相關(guān)。所以接下來我們用siRNA的方法抑制A375黑色素瘤....

圖6.4抑制CIRP基因?qū)375細(xì)胞IR處理后細(xì)胞存活的影響(n=3;*,P<0.05,**,P<0.01)

我們接下來檢測了細(xì)胞克隆生成的情況,結(jié)果如圖6.4所示,在未接受IR處理時,siRNA引起的CIRP的表達(dá)抑制能夠促使A375黑色素瘤細(xì)胞克隆生成數(shù)目的減少,當(dāng)細(xì)胞接受2Gy的電離輻射處理時,野生型A375細(xì)胞的克隆生成數(shù)目也明顯的下調(diào);當(dāng)抑制掉CIRP的表達(dá)并加上2Gy的輻射處....

本文編號：4047874