本文關(guān)鍵詞：自噬在維持卵巢癌干細(xì)胞特性中的作用

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【摘要】：目的： 觀察卵巢癌干細(xì)胞的自噬活性,并明確自噬激活對維持卵巢癌干細(xì)胞干性特征的作用。 方法： 1.以漿液性卵巢癌3AO細(xì)胞株為親本細(xì)胞,通過無血清懸浮培養(yǎng)的方法獲得卵巢癌干細(xì)胞。收集卵巢癌干細(xì)胞,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD24表達(dá),采用qRT-PCR和Western blot技術(shù)分別檢測干性標(biāo)記物Nestin、Oct-4和Nanog的mRNA和蛋白表達(dá)。 2.采用Western blot檢測3AO細(xì)胞和卵巢癌干細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Atg5和p62的表達(dá)；進(jìn)一步用BafAl抑制溶酶體降解過程,一方面采用共聚焦熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染GFP-LC3質(zhì)粒后細(xì)胞內(nèi)GFP-LC3-Ⅱ陽性小泡數(shù)量的變化,另一方面,采用Western blot檢測LC3-Ⅱ和P62表達(dá)變化,觀察細(xì)胞自噬流的大小。 3.通過shRNA干擾自噬基因Atg5,采用自噬抑制劑BafAl和CQ分別抑制卵巢癌干細(xì)胞自噬活性,首先用96孔板球囊形成實(shí)驗(yàn),觀察細(xì)胞自我更新能力的變化；再通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物CD24的變化；最后利用CCK8檢測細(xì)胞對紫杉醇的敏感性。 結(jié)果： 1.3AO卵巢癌細(xì)胞株通過無血清添加生長因子懸浮培養(yǎng)7天左右可以獲得CD24(-)表型為的卵巢癌干細(xì)胞,并且高表達(dá)干性標(biāo)記物Nestin. Oct-4和Nanog。 2.和卵巢癌細(xì)胞相比,卵巢癌干細(xì)胞自噬合成蛋白Atg5表達(dá)增加,而自噬降解蛋白p62表達(dá)降低；用溶酶體抑制劑BafAl抑制自噬降解后,一方面,卵巢癌和卵巢癌干細(xì)胞在共聚焦顯微鏡下GFP-LC3-Ⅱ日性小泡數(shù)量均發(fā)生累積,但是卵巢癌干細(xì)胞累積效果更明顯；另一方面,抑制自噬降解后,兩種細(xì)胞LC3-Ⅱ和p62蛋白表達(dá)均增加,但是卵巢癌干細(xì)胞增加更顯著。 3.抑制自噬后,卵巢癌干細(xì)胞的自我更新能力降低(所形成的球囊直徑變小、數(shù)量變少)、CD24(+)表型的細(xì)胞比例上升、對紫杉醇的敏感性增加。 結(jié)論： 1.卵巢癌干細(xì)胞具有更強(qiáng)的自噬活性。 2.自噬激活有助于維持卵巢癌干細(xì)胞的干性特性。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 腫瘤干細(xì)胞 自噬 自噬流
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 縮略詞9-11
• 前言11-17
• 參考文獻(xiàn)15-17
• 1 儀器設(shè)備和試劑17-23
• 2 材料與方法23-32
• 3 結(jié)果32-41
• 4 討論41-46
• 5 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 綜述49-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 作者簡歷59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Si-Zhao Lu;Duygu Dee Harrison-Findik;;Autophagy and cancer[J];World Journal of Biological Chemistry;2013年03期

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本文編號：731371