目的:代謝適應性對于腫瘤的進展至關重要,Warburg效應中癌細胞優(yōu)先利用乳酸而不是葡萄糖產能時,會模擬葡萄糖饑餓造成細胞自噬的發(fā)生。然而,乳酸在細胞自噬的誘導中是否發(fā)揮作用仍不清楚,因此,本文主要探討乳酸對細胞自噬的作用及分子機制。材料與方法:選取人肺癌細胞A549、H1299和H1688細胞作為研究對象。(1)通過Western blot探究乳酸在誘導細胞自噬中beclin1、p62和LC3蛋白表達量的變化;(2)通過兩種自噬抑制劑3-MA和HCQ探究是否能逆轉乳酸誘導的自噬;(3)通過免疫熒光分析自噬體的形成;(4)通過轉染beclin1 cDNA和beclin1siRNA,探究乳酸是否通過beclin1誘導細胞自噬;(5)通過雙熒光素酶報告基因實驗和CHX半衰期實驗,探究乳酸在轉錄前還是轉錄后調控beclin1蛋白表達;(6)通過轉染E3泛素連接酶NEDD4和CO-IP實驗,Western blot檢測beclin1的蛋白量;(7)通過解偶聯(lián)劑FCCP和乳酸聯(lián)用,Western blot檢測線粒體自噬相關蛋白parkin、beclin1、LC3蛋白表達量;(8)轉染beclin...

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【學位級別】：碩士

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圖1.4.1不同濃度乳酸對細胞自噬的影響

皖南醫(yī)學院碩士學位論文22結果1實驗結果1.1Westernblot檢測外源乳酸處理對肺癌細胞自噬相關蛋白表達水平的作用Westernblot結果顯示，在A549、H1299、H1688細胞中加入不同濃度的乳酸，隨著乳酸濃度的增加，自噬相關蛋白beclin1和LC3表達量均上升，....

圖1.4.2自噬抑制劑3-MA和HCQ可逆轉乳酸誘導的自噬

皖南醫(yī)學院碩士學位論文22結果1實驗結果1.1Westernblot檢測外源乳酸處理對肺癌細胞自噬相關蛋白表達水平的作用Westernblot結果顯示，在A549、H1299、H1688細胞中加入不同濃度的乳酸，隨著乳酸濃度的增加，自噬相關蛋白beclin1和LC3表達量均上升，....

圖1.4.3免疫熒光檢測乳酸誘導的自噬流

皖南醫(yī)學院碩士學位論文231.3mCherry-GFP-LC3雙標檢測乳酸處理下自噬流的變化在A549細胞中，轉染mCherry-GFP-LC3雙標質粒，并在轉染的基礎上加入10mM乳酸，雷帕霉素作為陽性對照，共聚焦顯微鏡下觀察自噬體的形成。免疫熒光結果顯示，與對照組相比，雷帕霉....

圖1.4.4乳酸通過beclin1誘導自噬

皖南醫(yī)學院碩士學位論文24圖1.4.4乳酸通過beclin1誘導自噬1.5Westernblot檢測乳酸通過MCT1進入細胞調控beclin1的表達Westernblot結果顯示，與對照組比，乳酸處理后beclin1表達水平增加，聯(lián)用CHC后，beclin1表達水平降低。圖1.4....

本文編號：3997834