【摘要】：帕金森病(Parkinson disease,PD)又稱震顫麻痹,是錐體外系功能紊亂引起的一種慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,病理上主要表現(xiàn)為腦和(或)脊髓發(fā)生神經(jīng)元退行性變性、脫失,并伴有神經(jīng)細胞大量死亡。迄今為止,該病的發(fā)病機制尚未完全闡明。有研究表明氧化應(yīng)激與PD密切相關(guān)。桃紅四物湯(Taohongsiwu Decoction,THSWT)是活血化瘀、養(yǎng)血補血的代表方,在臨床上有非常廣泛的應(yīng)用,常用于血瘀引起的多種病癥。近年來研究發(fā)現(xiàn),桃紅四物湯及主要成分在抗氧化損傷、神經(jīng)保護等方面能夠發(fā)揮很好的效果。本實驗利用魚藤酮誘導(dǎo)的SH-SY5Y細胞損傷模型進行體外實驗研究。待細胞貼壁達70-80%時,通過MTT法依次進行魚藤酮損傷模型的建立、桃紅四物湯及主要成分(羥基紅花黃色素A、阿魏酸、苦杏仁苷、梓醇和芍藥苷)安全濃度范圍篩選和發(fā)揮保護作用時的濃度篩選;利用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;通過Elisa實驗比較細胞損傷前后α-synuclein寡聚體形成情況;通過JC-1線粒體膜電位檢測評價藥物干預(yù)前后線粒體膜電位的變化。此外,通過western blot實驗比較給藥干預(yù)前后Bax、bcl-2、ERK1/2、p-ERK、caspase-3、p53等氧化應(yīng)激、細胞凋亡相關(guān)蛋白表達水平的變化,初步探討桃紅四物湯及其有效成分發(fā)揮神經(jīng)保護作用的機制。結(jié)果顯示,在安全劑量范圍內(nèi),桃紅四物湯及羥基紅花黃色素A、梓醇和芍藥苷等成分均可以提高魚藤酮損傷的SH-SY5Y細胞活力(P0.01),且呈劑量依賴性增加。倒置顯微鏡下觀察到細胞變圓,突觸短而少。在魚藤酮誘導(dǎo)的PD模型中,α-synuclein寡聚體形成顯著增多(P0.001),而桃紅四物湯可以抑制α-synuclein寡聚體形成(P0.05)。桃紅四物湯及羥基紅花黃色素A、阿魏酸、苦杏仁苷、梓醇和芍藥苷等可以逆轉(zhuǎn)魚藤酮導(dǎo)致的Δψ下降的現(xiàn)象。Western blot結(jié)果顯示桃紅四物湯、羥基紅花黃色素A和芍藥苷等能夠下調(diào)Bax/Bcl-2、caspase-3、p53的表達水平,同時上調(diào)p-ERK/ERK,從而拮抗魚藤酮引起的細胞凋亡。而阿魏酸和苦杏仁苷對p53、梓醇對p-ERK/ERK無明顯逆轉(zhuǎn)作用。綜上所述,桃紅四物湯在神經(jīng)保護作用方面有積極作用。此外,體外實驗還發(fā)現(xiàn)桃紅四物湯中的主要成分羥基紅花黃色素A、阿魏酸、苦杏仁苷、梓醇和芍藥苷同樣具有保護神經(jīng)元的作用。這可能是氧化應(yīng)激、線粒體功能、細胞凋亡共同作用的結(jié)果,可能由ERK通路介導(dǎo)發(fā)生(梓醇除外)。
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2679003