背景:齊墩果酸(Oleanolic acid,OA)對肝損傷有一定的保護作用,臨床上廣泛用于急、慢性肝炎的輔助治療。熊果酸(Ursolic acid,UA)作為齊墩果酸的同分異構(gòu)體,其結(jié)構(gòu)和藥理作用與齊墩果酸類似,亦具有較好的臨床應(yīng)用前景。課題組前期研究證實熊果酸的體內(nèi)代謝過程與Ⅱ相代謝酶UGT1A3、UGT1A4介導(dǎo)有關(guān),那么熊果酸及齊墩果酸對UGTs酶活性及表達是否有影響,它們與臨床藥物聯(lián)合使用時是否會發(fā)生基于UGTs介導(dǎo)的藥物相互作用,值得高度關(guān)注與研究探討。目的:通過UGTs重組酶及HepG2細(xì)胞模型,系統(tǒng)研究UA和OA對系列UGTs酶活性及其表達的影響,通過體內(nèi)-體外相互作用推算模型,預(yù)測臨床藥物間發(fā)生基于UGTs介導(dǎo)的相互作用風(fēng)險。方法:(1)UA和OA對UGTs重組酶活性的影響及相互作用風(fēng)險預(yù)測(1)采用重組UGTs酶體外溫孵體系,系統(tǒng)探索UA和OA對12種UGTs酶(UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15、UGT2B17)活性的影響。除UGT1A4采用三氟拉嗪作為探針底物,其他UGTs酶均采用其共同的代謝底物4-甲基傘形酮(4-MU)作為探針底物。(2)通過酶動力學(xué)研究,求算酶抑制動力學(xué)參數(shù)IC50值和Ki值,探討其酶動力學(xué)抑制作用類型及影響機制。(3)在酶動力學(xué)研究基礎(chǔ)上,結(jié)合相關(guān)文獻數(shù)據(jù),運用體內(nèi)-體外相互作用推算模型,預(yù)測UA和OA與臨床藥物間發(fā)生基于UGTs介導(dǎo)的相互作用風(fēng)險。(2)UA和OA對HepG2細(xì)胞中UGTs酶mRNA表達水平的影響使用HepG2細(xì)胞模型,通過RT-qPCR檢測技術(shù),研究UA和OA對8種常見UGTs酶(UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15)mRNA表達的影響,分析UA和OA與臨床藥物長期聯(lián)合用藥發(fā)生基于UGTs介導(dǎo)的相互作用風(fēng)險。結(jié)果:(1)UA和OA對UGTs重組酶活性的影響及相互作用風(fēng)險預(yù)測在12種UGTs重組酶中,UA和OA只對UGT1A3和UGT1A4的活性有明顯抑制作用。UA對UGT1A3的抑制作用呈競爭性抑制,其IC50值為0.391±0.013μM,Ki值是0.185±0.015μM。UA對UGT1A4催化三氟拉嗪葡萄糖醛酸反應(yīng)也呈現(xiàn)競爭性抑制作用,IC50值為2.651±0.201μM,Ki值是1.334±0.146μM)。OA對UGT1A3的抑制作用呈現(xiàn)混合競爭性抑制作用(競爭性和非競爭性抑制作用同時存在),其IC50值為0.336±0.013μM,Ki值0.176±0.007μM。而OA對UGT1A4呈現(xiàn)競爭性抑制作用,其IC50值是5.468±0.697μM,Ki值為6.298±0.891μM。通過體內(nèi)-體外藥物藥物相互作用推算模型進行預(yù)測,結(jié)果顯示UA和OA均對體內(nèi)UGT1A3酶活性有很強的抑制作用,其[I]in,u/Ki值分別為3.054與1.489(大于1),臨床上與UGT1A3的底物藥物聯(lián)用時發(fā)生相互作用的風(fēng)險很高。UA對體內(nèi)UGT1A4酶活性有較強的抑制作用,其[I]in,u/Ki值為0.424(介于0.1~1之間),臨床上與UGT1A4底物藥物聯(lián)用時發(fā)生相互作用的風(fēng)險一般。OA對體內(nèi)UGT1A4酶活性的抑制作用相對較弱,其[I]in,u/Ki值為0.042(小于0.1),臨床上與UGT1A4底物藥物聯(lián)用時發(fā)生相互作用的風(fēng)險很低。(2)UA和OA對HepG2細(xì)胞中UGTs酶mRNA表達水平的影響10μM、20μM、40μM的UA對HepG2細(xì)胞中UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9、UGT2B4、UGT2B15 mRNA表達均無明顯影響(P0.05)。10μM的OA對HepG2細(xì)胞中上述8種常見UGT酶mRNA表達亦無明顯影響(P0.05)。但20μM的OA對UGT1A1 mRNA的誘導(dǎo)倍數(shù)為1.55倍(P0.001)、UGT1A3為1.49倍(P0.001)、UGT1A4為2.40倍(P0.001)、UGT1A6為3.36倍(P0.001)、UGT1A9為1.30倍(P0.05)、UGT2B4為1.26倍(P0.01)、UGT2B7為1.53倍(P0.001)、UGT2B15為1.29倍(P0.01)。40μM的OA對UGT1A1 mRNA的誘導(dǎo)倍數(shù)為1.41倍(P0.001)、對UGT1A3為1.32倍(P0.01)、UGT1A6為1.56倍(P0.01)、UGT1A9為1.69倍(P0.001)、UGT2B15為1.20倍(P0.05)。結(jié)論:(1)UA對UGT1A3及UGT1A4均呈現(xiàn)競爭性抑制作用。OA對UGT1A3呈現(xiàn)混合競爭性抑制作用,對UGT1A4呈現(xiàn)競爭性抑制作用。(2)UA和OA均對UGT1A3酶活性有很強的抑制作用,在體內(nèi)與UGT1A3的底物藥物聯(lián)用時發(fā)生相互作用的風(fēng)險很高。UA對UGT1A4酶活性有較強的抑制作用,在體內(nèi)與UGT1A4底物藥物聯(lián)用時發(fā)生相互作用的風(fēng)險一般。OA對UGT1A4酶活性的抑制作用相對較弱,在體內(nèi)與UGT1A4底物藥物發(fā)生相互作用的風(fēng)險很低。(3)OA對HepG2細(xì)胞中UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15 mRNA表達均有誘導(dǎo)作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2742035