【摘要】：目的:建立可靠穩(wěn)定的明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)以及焦慮動(dòng)物模型,提供客觀規(guī)范的抗焦慮中藥藥效評價(jià)方法;在此基礎(chǔ)上研究荷葉黃酮的抗焦慮作用,為抗焦慮中藥提供候選藥物。方法:1明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)的建立1.1明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)的研制系統(tǒng)采用攝像視頻跟蹤技術(shù)識(shí)別目標(biāo)。硬件系統(tǒng)采用封閉的箱體,紅外燈作為背景光源,白熾燈作為明室光源,模擬自然環(huán)境。軟件采用Microsoft Visua1 C++6.0開發(fā),利用圖像處理、數(shù)據(jù)挖掘等技術(shù)提取多項(xiàng)指標(biāo)體系以及圖像信息。1.2系統(tǒng)可靠性、穩(wěn)定性的驗(yàn)證(1)40只Wistar大鼠,隨機(jī)分為兩組:明室無燈組(明室燈光照度為2 lux,暗室照度為2 lux)、明室有燈組(明室燈光照度為400 lux,暗室照度為2 lux),錄制視頻,人工記錄5min內(nèi)Wistar大鼠在檢測箱中兩室滯留時(shí)間,對系統(tǒng)所提供的明暗環(huán)境的進(jìn)行驗(yàn)證。(2)明暗環(huán)境成立的基礎(chǔ)上,人工手動(dòng)記錄5min內(nèi)40只Wistar大鼠在檢測箱中的運(yùn)動(dòng)時(shí)間,同時(shí)軟件根據(jù)不同的運(yùn)動(dòng)閾值(運(yùn)動(dòng)閾值取9、18、27、36、45、54 cm/s),分析得到不同的運(yùn)動(dòng)時(shí)間。將兩者記錄得到的運(yùn)動(dòng)時(shí)間進(jìn)行相關(guān)性分析,確定最佳的運(yùn)動(dòng)閾值。(3)在成立的明暗環(huán)境和最佳運(yùn)動(dòng)閾值下,記錄5 min內(nèi)20只Wistar大鼠的穿箱次數(shù)、入暗次數(shù)、明室時(shí)間以及暗室時(shí)間等指標(biāo),并將人工記錄數(shù)據(jù)與軟件分析結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析,對指標(biāo)可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。2焦慮動(dòng)物模型的建立2.1慢性應(yīng)激致雌雄大鼠焦慮模型的建立雌雄各24只SD大鼠,隨機(jī)分為雌性正常組、雄性正常組、雌性模型組、雌性模型組。慢性應(yīng)激模型組采用足電、禁水、禁食、光照、黑暗、單籠、傾斜等9種應(yīng)激因子刺激21天,每天隨機(jī)進(jìn)行1種應(yīng)激刺激。造模結(jié)束后,進(jìn)行大鼠曠場實(shí)驗(yàn)、新奇事物探索實(shí)驗(yàn)、明暗箱實(shí)驗(yàn)。2.2不確定性空瓶飲水應(yīng)激致大鼠焦慮模型的建立16只SD大鼠隨機(jī)分為:正常組、空瓶應(yīng)激模型組。分別在造模第7 d、14 d、21 d采用曠場實(shí)驗(yàn)、新奇事物探索實(shí)驗(yàn)和明暗箱實(shí)驗(yàn)評價(jià)不確定性空瓶應(yīng)激對SD大鼠焦慮的影響。2.3慢性束縛致小鼠焦慮模型的建立30只ICR小鼠按體重隨機(jī)分為:正常對照組、慢性束縛模型組。模型組每天束縛1次,每次6 h。14天后采用采用曠場實(shí)驗(yàn)、明暗箱實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)評價(jià)CRS對小鼠自主活動(dòng)能力以及焦慮的影響。3荷葉黃酮抗焦慮作用研究3.1荷葉黃酮對狀態(tài)性焦慮模型的抗焦慮作用研究90只ICR小鼠隨機(jī)分為空白對照組(0.5%CMC-Na)、荷葉黃酮低、中、高劑量組(0.75、1.5、3 g/kg)、陽性藥1組(氫溴酸西酞普蘭10mg/kg)、陽性藥2組(地西泮2 mg/kg)。灌胃給藥14天后,采用曠場實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、明暗箱實(shí)驗(yàn)評價(jià)荷葉黃酮對小鼠自主活動(dòng)能力及焦慮的影響。'3.2荷葉黃酮對小鼠慢性束縛狀態(tài)性焦慮模型的抗焦慮作用研究105只ICR小鼠隨機(jī)分正常對照組、束縛6h模型組、荷葉黃酮低、中、高劑量組(0.75、1.5、3 g/kg)、陽性藥1組(氫溴酸西酞普蘭10mg/kg)、陽性藥2組(地西泮2 mg/kg),灌胃給藥14天后,采用曠場實(shí)驗(yàn)、明暗箱實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)評價(jià)荷葉黃酮對CRS模型小鼠自主活動(dòng)能力以及焦慮的影響。結(jié)果:1明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)的建立1.1明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)的研制建立了穩(wěn)定可靠、單次可檢測4樣本、提取明室時(shí)間、穿箱次數(shù)、運(yùn)動(dòng)時(shí)間等20多項(xiàng)指標(biāo)體系以及多種圖像信息的明暗箱實(shí)驗(yàn)圖像分析處理系統(tǒng)。1.2系統(tǒng)可靠性、穩(wěn)定性的驗(yàn)證:(1)明室有燈組的穿箱次數(shù)(P0.05)、明室時(shí)間(P0.01)顯著減少、暗室時(shí)間顯著增加(P0.05),且暗室時(shí)間所占百分率為79.4%。(2)當(dāng)運(yùn)動(dòng)閾值為18 cm/s時(shí),r為0.996,人機(jī)相關(guān)系數(shù)最高(P0.01)。(3)運(yùn)動(dòng)閾值為18 cm/s時(shí),穿箱次數(shù)、明室滯留時(shí)間、暗室滯留時(shí)間等指標(biāo)參數(shù)的人機(jī)相關(guān)性系數(shù)r均大于0.99(P0.01)。2焦慮動(dòng)物模型的建立2.1慢性應(yīng)激致雌雄大鼠焦慮模型的建立雌雄模型組的中央運(yùn)動(dòng)時(shí)間、中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)時(shí)間比率、明室時(shí)間、穿箱次數(shù)均顯著減少(P0.01或p0.05),探索潛伏期(P0.01)均顯著性增加。2.2不確定性空瓶飲水應(yīng)激致大鼠焦慮模型的建立不確定空瓶模型在14d、21d時(shí),分別與對應(yīng)空白組相比,中央運(yùn)動(dòng)時(shí)間、明室時(shí)間顯著減少(P0.05)、探索潛伏期顯著增加(P0.05或P0.01)。2.3慢性束縛致小鼠焦慮模型的建立束縛模型組的中央?yún)^(qū)時(shí)間、中央?yún)^(qū)時(shí)間比率、穿箱次數(shù)、開臂時(shí)間、開臂時(shí)間百分比、開臂次數(shù)百分比均顯著減少(P0.05或P0.01)。3荷葉黃酮抗焦慮作用研究3.1荷葉黃酮對狀態(tài)性焦慮模型的抗焦慮作用研究荷葉黃酮(3g/kg)可顯著增加ICR小鼠OE(P0.01)。3.2荷葉黃酮對小鼠慢性束縛狀態(tài)性焦慮模型的抗焦慮作用研究與空白組相比,CRS模型組的OE%、0T%、明室時(shí)間、穿箱次數(shù)的均顯著減少(P0.05)。與CRS模型組相比,荷葉黃酮(3g/kg)組的OE、OE%、OT%、穿箱次數(shù)顯著增加(P0.05或P0.01)。結(jié)論:本研究采用視頻跟蹤、圖像處理、數(shù)據(jù)挖掘等技術(shù),創(chuàng)新性的研制了提取信息量大、數(shù)據(jù)可靠、單次檢測樣本量大、自動(dòng)化程度高的明暗箱圖像分析處理系統(tǒng);從心理應(yīng)激、軀體應(yīng)激、社會(huì)應(yīng)激等誘發(fā)因素角度,成功建立了慢性應(yīng)激(9種應(yīng)激)、不確定性空瓶飲水應(yīng)激(14d,21d)、慢性束縛(6h/d,14d)三種穩(wěn)定可靠、重復(fù)性較好的焦慮動(dòng)物模型�；诖�,研究荷葉的抗焦慮作用,得出荷葉黃酮(3g/kg)對狀態(tài)性、特質(zhì)性焦慮模型有抗焦慮作用。
【圖文】：

圖１－１－１明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)硬件效果圖逡逑注：Ａ明暗箱明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)硬件整體效果圖逡逑Ｂ明暗箱＠像分析處理系統(tǒng)硬件效果圖逡逑

頂部中間位置安裝有攝像頭，攝像頭上裝有紅外截止濾景光源波長８５０邋ｎｍ，側(cè)面平行照射，安裝于２倍于老鼠身約為（７－１０邋ｃｍ），底部為不銹鋼柵，鋼柵下方有用于收集抽屜。ＣＡＮ現(xiàn)場總線接收軟件發(fā)送指令，開啟紅外光，工暗箱中動(dòng)物活動(dòng)情況，采集到的模擬信號(hào)由圖像采集卡轉(zhuǎn)化件系統(tǒng)。本系統(tǒng)硬件跟實(shí)驗(yàn)室穿梭實(shí)驗(yàn)、獲得性無助采用的明暗箱實(shí)驗(yàn)圖像分析處理系統(tǒng)實(shí)物圖，見圖１－１－４。逡逑
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2664572