【摘要】：目的:研究紫草素對(duì)伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma,BL)細(xì)胞的殺傷作用;研究紫草素誘導(dǎo)BL細(xì)胞凋亡的分子調(diào)控機(jī)制;研究紫草素對(duì)BL細(xì)胞中C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路的影響;研究紫草素和多柔比星的聯(lián)合作用。方法:(1)MTT法檢測(cè)不同濃度及時(shí)間點(diǎn)紫草素對(duì)Namalwa和Raji 2株BL細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用。(2)Propidium Iodide(PI)/Hoechst雙染,熒光顯微鏡觀(guān)察紫草素作用前后細(xì)胞核形態(tài)及PI可染細(xì)胞(細(xì)胞膜完整性缺失)比例的變化。(3)Annexin V/7-AAD雙染,流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析紫草素作用前后BL細(xì)胞凋亡比率的改變以及加入凋亡抑制劑Z-VAD-FMK后對(duì)紫草素作用的影響。(4)Western Blot檢測(cè)紫草素作用后BL細(xì)胞內(nèi)凋亡通路及C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路的相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化。(5)熒光定量PCR檢測(cè)紫草素對(duì)BL細(xì)胞內(nèi)mi R-19a表達(dá)的影響。(6)構(gòu)建BL荷瘤小鼠模型,觀(guān)察紫草素對(duì)小鼠體重及瘤體生長(zhǎng)影響;治療結(jié)束取瘤稱(chēng)重并進(jìn)行HE染色、免疫組化、WB和PCR相關(guān)檢測(cè)。結(jié)果:(1)紫草素可抑制BL細(xì)胞株的生長(zhǎng),且抑制強(qiáng)度與紫草素濃度和作用時(shí)間呈正相關(guān)。(2)PI/Hoechst雙染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明紫草素可引起B(yǎng)L細(xì)胞胞核出現(xiàn)凋亡特征性變化,提示誘導(dǎo)凋亡是紫草素殺死腫瘤細(xì)胞的主要方式。(3)流式結(jié)果顯示隨著紫草素濃度的遞增,Annexin V+/7-AAD-和Annexin V+/7-AAD+的凋亡細(xì)胞比率顯著增加,且Z-VAD-FMK能減弱紫草素誘導(dǎo)凋亡作用。(4)Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示紫草素可引起凋亡信號(hào)通路中Caspase-3、8、9和PARP的剪切激活,抑制C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)。(5)q-PCR結(jié)果表明紫草素可抑制mi R-19a的表達(dá)。(6)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明紫草素可通過(guò)C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路顯著抑制荷瘤小鼠瘤體生長(zhǎng),且對(duì)小鼠的體重和肝功能無(wú)明顯影響。(7)紫草素能協(xié)同多柔比星發(fā)揮抗癌作用。結(jié)論:(1)無(wú)論是在體外還是體內(nèi),紫草素具有十分強(qiáng)效的抗BL細(xì)胞作用。(2)C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路的抑制可能參與了紫草素抗癌機(jī)制的調(diào)控。(3)聯(lián)合運(yùn)用紫草素和阿霉素來(lái)治療干預(yù)BL是潛在可行的。
【圖文】：

殺傷作用的 IC50 值，選擇 5 個(gè)濃度梯度的紫草素分如圖 1.2.1.3 所示，紫草素對(duì) Raji 和 Namalwa 細(xì)胞的 2.67 nM。這表明相較 Raji 細(xì)胞，Namalwa 細(xì)胞對(duì)紫草

果如圖 1.2.1.3 所示，，紫草素對(duì) Raji 和 Namalwa 細(xì)胞的 24192.67 nM。這表明相較 Raji 細(xì)胞，Namalwa 細(xì)胞對(duì)紫草素 1.2.1.1 不同濃度的紫草素在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì) Raji 細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2636577