【摘要】：研究目的:1.小檗堿能否緩解結(jié)腸癌進程中腸粘膜通透性增高;2.結(jié)腸癌進程中是否存在腫瘤細胞對腸粘膜多胺的掠奪;3.結(jié)腸癌進程中,小檗堿是否通過調(diào)節(jié)多胺機制達到對腸粘膜損傷的修復(fù)作用。研究方法:1.小檗堿對荷瘤鼠(HCT116)移植瘤生長的影響。建立荷瘤鼠(HCT116)模型,根據(jù)SPSS分組法隨機分成正常組、模型組、小檗堿低劑量組(6.25 mg/kg)、小檗堿中劑量組(12.5 mg/kg)及小檗堿高劑量組(25 mg/kg),觀察裸鼠日常生命體征與進食等情況并記錄。通過對給藥期間裸鼠腫瘤體積的測量、給藥結(jié)束后瘤重及抑瘤率的測定、結(jié)合荷瘤鼠體重變化曲線,評價小檗堿對裸鼠結(jié)腸癌移植瘤生長的抑制作用。2.小檗堿對荷瘤鼠(HCT116)腸粘膜通透性的影響。通過對荷瘤鼠血漿D-乳酸含量的測定、腸粘膜HE染色病理切片的觀察、瘤重與血漿D-乳酸相關(guān)性分析、腸粘膜緊密連接蛋白ZO1,Occludin的蛋白表達,觀察小檗堿對荷瘤鼠腸粘膜通透性的影響。3.小檗堿對荷瘤鼠(HCT116)腸粘膜損傷的保護作用機制研究。(1)小檗堿對HCT116及IEC6共培養(yǎng)體系中多胺含量的影響:采用CCK8法測定小檗堿對HCT116細胞增殖抑制作用,確定小檗堿劑量及最佳作用時間;進行IEC6細胞單培養(yǎng)(24 h,48 h,72 h)及不同時間點(24 h,48 h,72 h)的HCT116細胞與IEC6細胞共培養(yǎng)2,觀察IEC6細胞通透性(FD4濃度)的變化;HCT116細胞與IEC6細胞共培養(yǎng)后,采用高效液色譜法分別測定兩種細胞多胺含量。(2)小檗堿對HCT116荷瘤鼠腸粘膜多胺含量、腫瘤多胺含量及多胺代謝蛋白表達的影響:采用高效液相色譜法測定腸粘膜及腫瘤多胺含量,采用WB法觀察小檗堿給藥后腫瘤組織多胺代謝相關(guān)蛋白ODC、OAZ1、SSAT、C-MYC、HIF-1α的表達情況。實驗結(jié)果:1.小檗堿對荷瘤鼠(HCT116)移植瘤生長的影響。結(jié)果表明:模型組裸鼠腫瘤體積增長最快,與模型組相比,給藥組腫瘤體積增長緩慢;解剖后稱定瘤重,模型組瘤重明顯高于給藥組;計算抑瘤率后,給藥組低、中、高劑量組,抑瘤率分別為20.9%、33.7%、42.2%;在作出荷瘤鼠體重變化曲線后發(fā)現(xiàn),正常組體重明顯高于給藥組及模型組,其中,模型組最低,且在第三周,給藥組及模型組體重均出現(xiàn)小幅度下降,可能表現(xiàn)為癌性營養(yǎng)不良。2.小檗堿對荷瘤鼠(HCT116)腸粘膜通透性的影響。結(jié)果表明:正常組血漿D-乳酸濃度最低,與正常組比較,模型組及給藥組均較高,其中,模型組最高;通過腸粘膜病理切片發(fā)現(xiàn),模型組腸粘膜屏障被破壞嚴重,與模型組相比,給藥組腸粘膜損傷得到明顯修復(fù);在計算血漿D-乳酸與瘤重相關(guān)性曲線中,發(fā)現(xiàn)血漿D-乳酸與腫瘤負荷關(guān)系密切且呈正相關(guān)(P0.001);緊密連接蛋白ZO1,Occludin的結(jié)果表明,與正常組相比,模型組緊密連接蛋白下調(diào),與模型組相比,給藥后緊密連接蛋白表達上調(diào)。3.小檗堿對荷瘤鼠(HCT116)腸粘膜損傷的修復(fù)作用機制研究。(1)小檗堿對HCT116及IEC6共培養(yǎng)體系中多胺含量的影響:CCK8數(shù)據(jù)表明,小檗堿(0-50μM)對HCT116細胞有抑制作用,且72 h效果最好,48 h次之;HCT116細胞與IEC6細胞共培養(yǎng),通過測定IEC6的FD4濃度,得知48 h是最佳共培養(yǎng)時間點;在對共培養(yǎng)后HCT116,IEC6細胞多胺含量的測定中,結(jié)果為H_(co)H_(co給藥)H_單,I_單Ico_(給藥)Ico;(2)小檗堿對HCT116荷瘤鼠腸粘膜多胺含量、腫瘤多胺含量及多胺代謝蛋白表達的影響:對腸粘膜多胺含量的測定,與正常組相比,模型組總多胺濃度較低,與模型組相比,給藥組總多胺含量增加,且隨給藥濃度增大,多胺含量增加明顯;對腫瘤組織總多胺含量的測定,與模型組相比,給藥組總多胺下降明顯,且給藥組中高劑量有統(tǒng)計學意義(P0.001),腫瘤多胺代謝相關(guān)蛋白表達為C-MYC,ODC下調(diào),OAZ1上調(diào),SSAT上調(diào),HIF-1α上調(diào)。研究結(jié)論:1.小檗堿對結(jié)腸癌進程中腸粘膜通透性增高有緩解作用;2.結(jié)腸癌進程中存在腫瘤細胞對腸粘膜多胺的掠奪;3.結(jié)腸癌進程中,小檗堿可通過多胺機制達到對腸粘膜損傷的修復(fù)作用。
【圖文】：

統(tǒng)計分析方法驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差（Mean±SD）表示，采用單因素方差分析GraphPad Prism5.0 軟件分析，以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義，P＜有極顯著統(tǒng)計學意義。驗結(jié)果小檗堿對荷瘤鼠腫瘤體積的影響驗分為正常組（正常裸鼠，無移植瘤，生理鹽水），模型組（生理低劑量（6.25 mg/kg），小檗堿中劑量（12.5 mg/kg），小檗堿高劑）。給藥過程中，隔天測量腫瘤大小，，如圖 2-1 所示，模型組腫瘤，與模型組相比，給藥組腫瘤體積增長緩慢，表明小檗堿有抑制腫。

廣東藥科大學碩士研究生學位論文荷瘤鼠腫瘤瘤重的影響法已確認造模成功，給藥結(jié)束后立即處死裸鼠，剝下腫瘤如圖 2-2 所示，肉眼可見小檗堿給藥組腫瘤小于模型組，較為明顯。如圖 2-3 所示，模型組腫瘤組織重量 0.92±0.35，12.5，25 mg/kg）分別為 0.72±0.23 g，0.61±0.31 g，0.5知，與模型組相比，給藥組瘤重明顯低于模型組，其中小計學意義（P＜0.05）。
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2636562