【摘要】：目的為了探究趕黃草和葛花配伍制備的含藥血清對乙醇誘導下的L-02肝細胞的影響及其機制。方法SD大鼠50只隨機分為5組,分別給予趕黃草配伍葛花1:1水煎液,2:1水煎液,1:2水煎液,生理鹽水和凱西萊灌胃制備含藥血清。體外培養(yǎng)L-02肝細胞,將其分為:空白組,模型組,趕黃草配伍葛花1:1組,2:1組,1:2組和凱西萊組。各組先加入相應的含藥血清,1小時后除空白組外,其余各組均給予100 mmol/L乙醇誘導損傷24h。MTT法檢測L-02細胞存活率情況,酶標儀檢測各組培養(yǎng)液及細胞中肝酶ALT、AST、SOD、MDA的活性,篩選出對乙醇損傷肝細胞模型具有更好治療作用的趕黃草和葛花配伍組合。real-time PCR法檢測TNF-α、IL-6、Nrf2、HO-1 mRNA的表達,Western-blot法檢測TNF-α,IL-6、Nrf2、HO-1蛋白的表達,從而探討趕黃草配伍葛花組方對乙醇損傷肝細胞模型的作用機制及最佳配伍。結果1.對乙醇損傷肝細胞轉(zhuǎn)氨酶活性的影響:模型組ALT、AST均顯著高于空白組,給藥后各治療組值均低于模型組且具有統(tǒng)計學差異。但各配伍組之間的ALT、AST值相比較,未見效果最佳配伍組。2.對乙醇損傷肝細胞SOD、MDA活性的影響:模型組MDA顯著高于空白組,而SOD顯著低于空白組;各個給藥組與模型組相比,MDA低于模型組,SOD顯著高于模型組且具有統(tǒng)計學差異。但各組之間的SOD、MDA值相比較,未見效果更突出的配伍組。3.機制研究中,趕黃草配伍葛花組方均能顯著下調(diào)乙醇損傷肝細胞模型中TNF-α和IL-6的基因和蛋白的表達,說明其具有調(diào)節(jié)體內(nèi)促炎細胞因子的平衡的作用。1:2組下調(diào)TNF-α蛋白效果最好。4.機制研究中,趕黃草配伍葛花組方均能顯著上調(diào)乙醇損傷肝細胞模型中Nrf2和HO-1的基因和蛋白的表達,說明其具有調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化與抗氧化平衡的作用。2:1組上調(diào)Nrf2基因效果最好。1:1組上調(diào)Nrf2蛋白效果最好。結論(1)各組趕黃草配伍葛花含藥血清對乙醇誘導的肝細胞損傷有顯著的治療作用,1:1組治療趨勢稍明顯。(2)趕黃草配伍葛花含藥血清可通過下調(diào)TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表達,同時上調(diào)Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白的表達,從而降低L-02肝細胞的炎癥反應和減輕氧化應激,進而發(fā)揮抗酒精性肝損傷作用,可能存在新的通路。
【圖文】：

圖 1:含藥血清對乙醇損傷 L-02 細胞中 TNF-α， IL-6 mRNA 的影響s of Drug-containing serum on expression of TNF-α，IL-6，Nrf2 and HO-1 mRNL-02 liver cells induced by Ethanolern blot 法檢測 TNF-α，IL-6，Nrf2 and HO-1 蛋白的表達F-α，IL-6 蛋白的表達顯示：與空白組相比，模型組 TNF-α，IL-6 蛋白表達均顯著上調(diào)，有P<0.01）。與模型組相比，1:1 組、2:1 組、和凱西萊組 TNF-α，IL-6下調(diào)，有統(tǒng)計學差異（P<0.01）。配伍治療組間 1:2 組下調(diào) TNF-α 效組，見下圖及表 7。

干預劑量TNF-a I0 0.262±0.180 0.2100mmol/L 0.887±0.016* 0.812.5g/kg 0.627±0.007△0.618.75g/kg 0.669±0.047△0.518.75g/kg 0.488±0.047△0.560mg/kg 0.654±0.022△0.5<0.01；△與模型組比較 P<0.01。Western-blot 圖片:a b c d e f
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2603262