發(fā)布時(shí)間：2025-01-04 03:41

　　目的:探究非甲基化CpG寡聚脫氧核苷酸(ODN)對人膀胱癌的抗腫瘤作用,以及探究表柔比星與卡介苗對人膀胱癌細(xì)胞的聯(lián)合作用。方法:對于探究CpG ODN對人膀胱癌的抗腫瘤作用,我們常規(guī)培養(yǎng)人膀胱癌細(xì)胞,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)方法檢測CpG ODN處理后的膀胱癌細(xì)胞的體外增殖情況,探究膀胱癌細(xì)胞對CpG ODN的劑量-時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,選取合適的細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。以卡介苗作陽性對照,比較CpG ODN的對膀胱癌細(xì)胞的體外增值情況。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CpG ODN作用膀胱癌細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡情況和細(xì)胞周期分布。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)檢測藥物處理后的膀胱癌細(xì)胞中促凋亡因子caspse-3、p53和B細(xì)胞淋巴瘤2相關(guān)X蛋白(Bax)的表達(dá)水平,以及抗凋亡因子B細(xì)胞淋巴瘤2(Bcl-2)的表達(dá)水平。對于表柔比星聯(lián)合卡介苗對膀胱癌細(xì)胞作用的探究,同樣常規(guī)培養(yǎng)人膀胱癌細(xì)胞,表柔比星、卡介苗單獨(dú)作用以及兩者聯(lián)合作用于膀胱癌細(xì)胞,采用CCK-8方法檢測藥物處理作用后的細(xì)胞的細(xì)胞活性,選取合適的細(xì)胞株及濃度進(jìn)行后續(xù)機(jī)制實(shí)驗(yàn)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測表柔比星、卡介苗單...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1轉(zhuǎn)膜圖示

直至膜完全變透明。3）將海綿和濾紙預(yù)先泡入轉(zhuǎn)膜緩沖液中。海綿、濾紙、膠和PVDF膜按圖1-1所示擺放，注意轉(zhuǎn)膜夾子正負(fù)極和整個(gè)過程中不能有氣泡。圖1-1轉(zhuǎn)膜圖示Figure1-1Transfergraphic4）將轉(zhuǎn)膜夾子置于轉(zhuǎn)膜槽中，注意夾子與轉(zhuǎn)膜槽的正負(fù)極。在....

圖1-1轉(zhuǎn)膜圖示

3)將海綿和濾紙預(yù)先泡入轉(zhuǎn)膜緩沖液中。海綿、濾紙、膠和PVDF膜按圖1-1所示擺放,注意轉(zhuǎn)膜夾子正負(fù)極和整個(gè)過程中不能有氣泡。4)將轉(zhuǎn)膜夾子置于轉(zhuǎn)膜槽中,注意夾子與轉(zhuǎn)膜槽的正負(fù)極。在冰浴中以100V電泳90min。

圖1-2 CpG ODN對人膀胱癌細(xì)胞的活性影響

3.1CpGODN抑制人膀胱癌細(xì)胞的活性如圖所示,CpGODN隨濃度的增大和時(shí)間點(diǎn)的延長,對人膀胱癌UM-UC-3細(xì)胞的活性抑制作用越明顯(圖1-2A)。在24h,CpGODN濃度為10μM時(shí),其細(xì)胞活性顯著降低(P<0.05);在48h,CpGODN濃度為0.1μ....

圖1-3卡介苗對人膀胱癌細(xì)胞的活性影響

3.2卡介苗抑制人膀胱癌細(xì)胞的活性如圖所示,卡介苗作用于人膀胱癌UM-UC-3細(xì)胞,隨時(shí)間和濃度的增加,對膀胱癌細(xì)胞的活性產(chǎn)生抑制作用。在24h,菌落數(shù)與細(xì)胞數(shù)比值≤5時(shí),卡介苗對膀胱癌細(xì)胞的促凋亡作用并不明顯,但在48h卻起明顯的促凋亡的作用(**P<0.01),這說明在....

本文編號：4022850