發(fā)布時間：2020-07-21 07:48

【摘要】：多氯聯(lián)苯118(2,3’,4,4’,5-Pentachlorobiphenyl,PCB118)及其羥基代謝產(chǎn)物4-羥基-多氯聯(lián)苯107(4-Hydroxy-2,3,3’,4’,5-Pentachlorobiphenyl,4-OH-CB107)均是典型的內(nèi)分泌干擾物(Endocrine Disrupting Chemicals,EDCs),對動物及人體具有內(nèi)分泌干擾效應(yīng)。針對PCBs(Polychlorinated Biphenyls,PCBs)和羥基多氯聯(lián)苯(Hydroxylated Polychlorinated Biphenyls,OH-PCBs)內(nèi)分泌干擾效應(yīng)的研究主要集中于對動物和人體的甲狀腺素和雌激素干擾效應(yīng),對神經(jīng)內(nèi)分泌干擾效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制研究相對較少。本研究以小鼠下丘腦永生促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-Releasing Hormone,GnRH)神經(jīng)元離體細(xì)胞系GT1-7細(xì)胞為模型,研究PCB118和4-OH-CB107對GT1-7細(xì)胞分泌GnRH的影響及相關(guān)機(jī)制。不同濃度PCB118(0~50000 nM)和4-OH-CB107(0~500 nM)分別處理GT1-7細(xì)胞6 h、12 h、24 h和48 h,采用CCK-8法檢測細(xì)胞存活率、Annexin V-FITC/PI雙染法定量檢測細(xì)胞凋亡和乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)釋放試驗檢測LDH活性,初步探究PCB118和4-OH-CB107分別對GT1-7細(xì)胞的毒性作用。選取不同濃度PCB118(0、0.05、5、500、50000 nM)和4-OH-CB107(0、0.05、5、500 nM)分別處理GT1-7細(xì)胞6 h和24 h,應(yīng)用ELISA試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中GnRH濃度,進(jìn)而利用蛋白印跡和實時熒光定量PCR技術(shù)分別檢測Kisspeptin/GPR54信號通路中相關(guān)蛋白及其mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PCB118(0.05~50000nM)處理GT1-7細(xì)胞6 h、12 h、24 h和48 h后,細(xì)胞存活率呈劑量和時間依賴性顯著降低,僅高濃度PCB118(50000 nM)顯著促進(jìn)LDH的釋放和細(xì)胞的早期凋亡;PCB118處理GT1-7細(xì)胞6 h,5、500和50000 nM組中GnRH分泌量顯著降低,Kisspeptin/GPR54信號通路上GnRH、GPR54、PLC和PKC等蛋白的表達(dá)水平顯著下降,然而,5 nM和500 nM PCB118顯著下調(diào)PLC和PKC基因mRNA的表達(dá)水平,對GnRH和GPR54基因mRNA的表達(dá)為顯著影響;處理24 h,500和50000 nM PCB118顯著抑制GT1-7細(xì)胞分泌GnRH,GnRH、GPR54、PLC和PKC等蛋白和基因mRNA的表達(dá)水平顯著下降。4-OH-CB107(0.05~500 nM)處理GT1-7細(xì)胞48 h顯著降低GT1-7細(xì)胞存活率;0.05 nM 4-OH-CB107處理GT1-7細(xì)胞6 h顯著促進(jìn)GnRH分泌,GnRH、GPR54、PLC和PKC等蛋白和基因mRNA表達(dá)水平顯著增加;500 nM 4-OH-CB107處理GT1-7細(xì)胞24 h顯著促進(jìn)GnRH分泌,GnRH、GPR54、PLC和PKC等蛋白和基因mRNA的表達(dá)水平顯著增加;雖然5 nM 4-OH-CB107處理24 h未顯著影響GnRH分泌量,但能促進(jìn)GnRH、GPR54、PLC和PKC等蛋白及其基因mRNA的表達(dá)。綜上所述,PCB118(0.05~50000 nM)和羥基多氯聯(lián)苯4-OH-CB107(0.05~500 nM)均具有抑制GT1-7細(xì)胞增殖的毒性作用,具有時間和劑量效應(yīng)。PCB118僅在50000 nM時促進(jìn)LDH釋放和細(xì)胞早期凋亡,具有顯著細(xì)胞毒性;PCB118可通過顯著下調(diào)Kisspeptin/GPR54信號通路GPR54、PLC和PKC基因mRNA及蛋白表達(dá)水平抑制GnRH合成與分泌,其羥基代謝產(chǎn)物4-OH-CB107可通過上調(diào)Kisspeptin/GPR54信號通路GPR54、PLC和PKC基因mRNA及蛋白表達(dá)水平促進(jìn)GnRH合成與分泌,但Kisspeptin/GPR54信號通路僅部分介導(dǎo)PCB118和4-OH-CB107干擾GT1-7細(xì)胞分泌GnRH。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R99
【圖文】：

65 年起開始生產(chǎn) PCBs，至 1974 年左右停產(chǎn)，總計生三氯聯(lián)苯的量約占 90%，其余為五氯聯(lián)苯，主要用劑（Mai，2005）。隨著對 PCBs 的深入認(rèn)識，發(fā)現(xiàn)其性、高毒性等特點(diǎn)（Cao xiangzhong，2008），極易通構(gòu)成巨大的潛在威脅，是一類典型的持久性有機(jī)污染因此，1976 年左右 PCBs 逐漸被世界各國停止生產(chǎn)和染物的斯德哥爾摩公約》將其列入優(yōu)先控制12類POP代情況對其毒性有決定性的影響，并據(jù)此將 209 種ke Polychlorinated Biphenyls，DL-PCBs）和非類二VAiphenyls，NDL-PCBs）兩大類。DL-PCBs 在鄰位（2與四氯二苯并-p-二VA英（Tetrachlortetrachlorodibenzo稱為共平面 PCBs，表現(xiàn)出與芳香烴受體（Aryl Hydr是毒性最強(qiáng)的一類 PCBs。NDL-PCBs 的同邊鄰位被兩個苯環(huán)分子處于不同平面，稱為非共面 PCBs，該）。

論文 PCB118 暴露不僅造成機(jī)體代謝紊亂和生殖功能異常，ma，2004；Gregoraszczuk，2008；郭宏偉，2015；LinPCB118 具有干擾 GT1-7 細(xì)胞分泌 GnRH 的作用；據(jù)報道卵巢內(nèi)膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)時雌激素的分泌（Gr現(xiàn)低濃度 PCB118 可抑制人甲狀腺原代細(xì)胞 Tg、T4 的。

抗 PCB118 對 GT1-7 細(xì)胞分泌 GnRH 的抑制作用，產(chǎn)物 OH-PCBs 介導(dǎo) ER 途徑來發(fā)揮神經(jīng)內(nèi)分泌干擾效7 簡介人體血液內(nèi)主要的 OH-PCBs 之一，是 PCB118 或 PC，分子結(jié)構(gòu)如圖 1.3 所示，其對動物和/或人體潛在來越廣泛的關(guān)注。在 4-OH-CB107 或者 PCBs 混合物 A鼠的血漿和腦組織中 T4 總量降低（Meerts，2002）7 暴露 Wistar 大鼠能誘發(fā)神經(jīng)發(fā)育毒性，包括改變行動發(fā)生的延遲。Kester 等（2000）報道 OH-PCB 能有促進(jìn)硫酸鹽化作用和雌激素鈍化。同時，Purinton 等腦干中檢測到雌激素磺酰基轉(zhuǎn)移酶，這表明 4-OH-CB神經(jīng)發(fā)育。在一項人類試驗中，臍帶血中 4-OH-CB10可能與其引發(fā)的內(nèi)分泌干擾、神經(jīng)遞質(zhì)功能紊亂或Park，2009）。因此，OH-PCBs 的內(nèi)分泌干擾作用和

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本文編號：2764117