本文關鍵詞：氨肽酶N抑制劑與5-FU及其衍生物聯(lián)合抗腫瘤活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：惡性腫瘤嚴重威脅著人類的生命健康,它的治療是醫(yī)學上亟待解決的難題。目前,化學治療在惡性腫瘤的治療中起著不可或缺的角色。然而,由于腫瘤多藥耐藥性的出現(xiàn)以及腫瘤干細胞的存在,單一化療藥物無法起到很好的治療效果,加之新藥研發(fā)成本過高、進度遲緩,因而無法滿足臨床需求�？鼓[瘤藥物的聯(lián)合使用作為一種高效低毒的治療策略越來越受到人們的關注與重視,尤其是靶向藥物和細胞毒類藥物的聯(lián)用為腫瘤的徹底治愈提供了可能。5-FU是一種常用的化療藥物,然而,由于其存在骨髓抑制,胃腸道反應等嚴重的不良反應,使其在臨床上的應用逐漸受到限制。聯(lián)合用藥的出現(xiàn)為5-FU在臨床上的應用找到了一條新的出路,其中,氨肽酶N抑制劑與5-FU的聯(lián)合應用受到了科學家們的重視。氨肽酶N(Aminopeptidase N, APN)隸屬于金屬蛋白酶M1家族中的Gluzincins亞族中的一員,它能夠降解細胞外基質(zhì)與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有著重要的聯(lián)系,一直是抗腫瘤藥物研究的熱門靶點。因此,本課題選擇氨肽酶N抑制劑與5-FU聯(lián)合應用進行研究。通過以下幾方面進行研究并得到了相關結論：(1)體外活性評價：首先通過體外酶活實驗初步確實了二者聯(lián)用不會產(chǎn)生相互作用,5-FU不影響氨肽酶N抑制劑與其結合位點的結合；再通過流式細胞儀檢測各種腫瘤細胞表面氨肽酶N的表達量,發(fā)現(xiàn)人卵巢癌細胞(ES-2)與人小細胞肺癌(A549)為高表達,選擇ES-2進行細胞酶活實驗,細胞酶活實驗進一步證實了5-FU不會與氨肽酶N以及氨肽酶N抑制劑中的其中任何一個發(fā)生相互作用,這一結論為二者能夠聯(lián)合提供了合理性證明。然后進行了八株腫瘤細胞的抑制增殖實驗,結果顯示,聯(lián)合用藥組的抑制能力明顯優(yōu)于單獨5-FU以及Bestatin組,其中在大部分腫瘤細胞中5-FU:Bestatin 5:1 與 5-FU:Bestatin 10:1作用較為突出；正常細胞毒實驗結果證明聯(lián)合用藥的毒性5-FU:Bestatin 5:1是單獨5-FU組的1/6,5-FU:Bestatin 10:1是其1/2,因此最終選擇5：1進行后續(xù)實驗。體外實驗初步證明聯(lián)合用藥具有減毒增效的作用。(2)體內(nèi)活性評價：H22荷瘤小鼠實驗中,5-FU聯(lián)合Bestatin的低劑量組抑瘤率接近于單獨5-FU給藥組,分別為50.4%與49.2%,高劑量聯(lián)合用藥組抑瘤率達到了62%, Bestatin單獨給藥組抑瘤率僅僅為30.6%,而且5-FU單獨給藥組出現(xiàn)了動物死亡,體重下降的現(xiàn)象,這在聯(lián)合用藥組及Bestatin單獨給組中沒有出現(xiàn)�？梢�5-FU聯(lián)合Bestatin確實具有減毒增效的作用。(3)機制的初步研究：通過流式細胞儀對各實驗組進行凋亡與周期檢測,在人卵巢癌細胞(ES-2)與人肝癌細胞(PLC/PRF/5)的凋亡率分別為：Bestatin為25.01%,5-FU為28.48%,而5-FU:Bestatin 5:1為41.58%; Bestatin為6.57%,5-FU為8.85%,而5-FU:Bestatin 5:1為20.86%,聯(lián)合用藥大大的增加了對細胞凋亡的誘導作用,這可能是兩藥聯(lián)合應用具有更好的體內(nèi)體外抑制腫瘤細胞增殖的原因之一。PLC/PRF/5細胞的周期檢測結果顯示,聯(lián)合用藥使大部分腫瘤細胞阻滯S期,相對于5-FU來說,它對于Go/G1期細胞也有一定的阻滯作用。(4)氨肽酶N抑制齊4Q, M03與5-FU聯(lián)合：此部分主要對本實驗室設計的氨肽酶N抑制劑與5-FU的聯(lián)合進行了體外活性的評價。首先通過體外酶活實驗與ES-2細胞表面酶活實驗確定了4Q,M03與5-FU聯(lián)用不會產(chǎn)生相互作用,5-FU不影響氨肽酶N抑制劑與其結合。MTT實驗證明氨肽酶N抑制劑4Q,M03與5-FU聯(lián)合對多種腫瘤細胞的增殖具有抑制作用。體外活性實驗證明氨肽酶N抑制劑4Q,M03與5-FU聯(lián)合有較強的抗腫瘤活性。(5)5-FU衍生物與Bestatin聯(lián)合：為了使聯(lián)合給藥方便,設計用與Bestatin給藥方式相同的口服給藥有效的5-FU衍生物希羅達與替加氟聯(lián)用。MTT實驗證明聯(lián)合用藥可以抑制多種腫瘤細胞的體外增殖活性,且大多以1：1的比例為最佳。以此比例進行動物實驗,結果希羅達高劑量組與替加氟高劑量組抑瘤率均高于希羅達,替加氟單獨給藥組動物并沒有出現(xiàn)體重下降的現(xiàn)象。體內(nèi)體外活性結果說明5-FU衍生物與Bestatin聯(lián)合具有很好的抗腫瘤活性。總體來說,氨肽酶N抑制劑與5-FU及其衍生物聯(lián)合抗腫瘤具有相對更好的療效,毒副作用低,耐受性好,具有很好的臨床開發(fā)價值。
【關鍵詞】：
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R914.5;R96
【目錄】：

• 摘要12-14
• ABSTRACTS14-17
• 符號說明17-18
• 第一章 前言18-38
• 1.1 聯(lián)合用藥18-23
• 1.1.1 抗菌藥物的聯(lián)合用藥20
• 1.1.2 抗高血壓藥物的聯(lián)合應用20-21
• 1.1.3 抗腫瘤藥物的聯(lián)合應用21-23
• 1.2 APN/CD1323-35
• 1.2.1 APN/CD13結構24-27
• 1.2.2 氨肽酶N的組織分布27-28
• 1.2.3 氨肽酶N的生物功能28-30
• 1.2.4 氨肽酶N與腫瘤的關系30-33
• 1.2.5 氨肽酶N抑制劑33-35
• 1.3 5-氟尿嘧啶35-38
• 1.3.1 5-氟尿嘧啶的理化性質(zhì)35
• 1.3.2 5-氟尿嘧啶的抗腫瘤機制35-36
• 1.3.3 5-氟尿嘧啶的研究進展36-38
• 第二章 氨肽酶N抑制劑烏苯美司聯(lián)合5-氟尿嘧啶酶活評價38-45
• 2.1 引言38
• 2.2 實驗材料與儀器38-39
• 2.2.1 材料38-39
• 2.2.2 儀器39
• 2.3 聯(lián)合用藥體外抑酶實驗39-41
• 2.3.1 實驗原理39-40
• 2.3.2 實驗方法40
• 2.3.3 實驗結果40-41
• 2.4 氨肽酶N的表達41-42
• 2.4.1 實驗原理41
• 2.4.2 實驗方法41-42
• 2.4.3 實驗結果42
• 2.5 ES-2細胞酶活42-44
• 2.5.1 實驗原理42-43
• 2.5.2 實驗方法43
• 2.5.3 實驗結果43-44
• 2.6 小結44-45
• 第三章 氨肽酶N抑制劑Bestatin聯(lián)合5-FU細胞活性評價45-53
• 3.1 引言45
• 3.2 實驗材料與儀器45-46
• 3.2.1 材料45-46
• 3.2.2 儀器46
• 3.3 細胞系46-47
• 3.3.1 腫瘤細胞系46-47
• 3.3.2 正常細胞系47
• 3.4 MTT實驗47-48
• 3.4.1 實驗原理47
• 3.4.2 實驗方法47-48
• 3.4.3 實驗結果48
• 3.5 正常細胞毒性實驗48-50
• 3.5.1 實驗原理49
• 3.5.2 實驗方法49
• 3.5.3 實驗結果49-50
• 3.6 集落生成實驗50-52
• 3.6.1 實驗原理50
• 3.6.2 實驗方法50-51
• 3.6.3 實驗結果51-52
• 3.7 小結52-53
• 第四章 氨肽酶N抑制劑Bestatin聯(lián)合5-FU體內(nèi)活性評價53-58
• 4.1 引言53
• 4.2 實驗材料與儀器53-54
• 4.2.1 材料53-54
• 4.2.2 儀器54
• 4.3 H22腹水種鼠54-55
• 4.3.1 H22細胞的復蘇54-55
• 4.3.2 H22種鼠55
• 4.4 實驗方法55-56
• 4.4.1 H22荷瘤模型的建立55
• 4.4.2 分組給藥55-56
• 4.5 實驗結果56-57
• 4.6 小結57-58
• 第五章 氨肽酶N抑制劑Bestatin聯(lián)合5-FU的作用機制58-64
• 5.1 引言58
• 5.2 實驗材料與儀器58-59
• 5.2.1 材料58-59
• 5.2.2 儀器設備59
• 5.3 細胞系59-60
• 5.4 ES-2細胞凋亡60-61
• 5.4.1 赫斯特33342染色60
• 5.4.2 流式細胞檢測凋亡60-61
• 5.5 PLC/PRF/5細胞凋亡61-62
• 5.5.1 赫斯特33342染色61-62
• 5.5.2 流式細胞檢測凋亡62
• 5.6 PLC/PRF/5細胞周期檢測62-63
• 5.6.1 實驗原理62
• 5.6.2 實驗方法62-63
• 5.6.3 實驗結果63
• 5.7 小結63-64
• 第六章 5-FU衍生物與氨肽酶N抑制劑的聯(lián)合用藥64-73
• 6.1 引言64
• 6.2 氨肽酶N抑制劑4Q,M03與5-FU的聯(lián)合64-68
• 6.2.1 主要材料與儀器64-65
• 6.2.2 酶活65
• 6.2.3 ES-2細胞表面酶活65-66
• 6.2.4 MTT法66-68
• 6.3 5-FU衍生物與氨肽酶N抑制劑Bestatin的聯(lián)合68-72
• 6.3.1 MTT實驗68-70
• 6.3.2 H22昆明鼠荷瘤實驗70-72
• 6.4 小結72-73
• 總結與展望73-75
• 參考文獻75-83
• 致謝83-84
• 攻讀學位期間發(fā)表學術論文84-85
• 學位論文評閱及答辯情況表85

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 賈軍梅;趙和平;郭亞榮;;消癌平聯(lián)合奧曲肽對原發(fā)性肝癌患者免疫功能的影響[J];中國藥物與臨床;2011年10期

2 于波濤,張志榮,曾仁杰;肝靶向氟尿嘧啶類脂納米粒的研究[J];藥學學報;2000年09期

3 鄭寶英;張杰;;抗生素的聯(lián)合用藥[J];中國抗生素雜志;2007年06期

  本文關鍵詞：氨肽酶N抑制劑與5-FU及其衍生物聯(lián)合抗腫瘤活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：256943