本文關(guān)鍵詞：豬囊尾蚴膜聯(lián)蛋白基因的原核表達(dá)和免疫學(xué)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的對(duì)豬囊尾蚴AF239799-1膜聯(lián)蛋白基因進(jìn)行高效原核表達(dá),對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行免疫學(xué)分析。方法通過DNA自動(dòng)合成儀,用固相亞磷酸酰胺法合成一段5'端有NdeⅠ內(nèi)切酶位點(diǎn),3'端有XhoⅠ內(nèi)切酶位點(diǎn)的豬囊尾蚴AF239799-1基因序列,并將其克隆到原核表達(dá)載體pET28a(+)中,經(jīng)測(cè)序、PCR及雙酶切鑒定后,將其轉(zhuǎn)入到宿主菌E.coli BL21(DE3)中,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進(jìn)行鑒定,并用Ni-NTA親和層析柱純化,純化的重組蛋白用Western blot進(jìn)行免疫學(xué)分析。結(jié)果該基因全長(zhǎng)為1 250bp,編碼區(qū)為2~1 042bp,編碼346個(gè)氨基酸,理論分子質(zhì)量、等電點(diǎn)分別為40.39ku和6.80。經(jīng)DNA測(cè)序、PCR及雙酶切鑒定,pET28a(+)-AF239799-1重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。重組質(zhì)粒在E.coli BL21(DE3)主要以包涵體形式表達(dá),Western blot顯示重組蛋白可被豬帶絳蟲病豬血清識(shí)別。結(jié)論豬囊尾蚴AF239799-1基因可在原核表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物具有免疫反應(yīng)性。
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學(xué)院臨床生化教研室;
【關(guān)鍵詞】： 豬囊尾蚴 AF-基因 原核表達(dá) 免疫反應(yīng)性
【基金】：2012年度貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長(zhǎng)基金項(xiàng)目[黔省專合字2012(43)號(hào)]
【分類號(hào)】：R383.34
【正文快照】： ***豬囊尾蚴病是一種人畜共患病,在許多國家包括中國在內(nèi)有著廣泛的流行區(qū)域,全國大約存在1 000萬名囊尾蚴病患者,每年屠宰的囊尾蚴病豬大約有1200萬頭,每年造成經(jīng)濟(jì)損失大約20億元,它不僅對(duì)人類健康造成嚴(yán)重危害,也對(duì)養(yǎng)豬行業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1-3]。因此,開展豬囊尾蚴病的

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