發(fā)布時(shí)間：2017-05-03 00:05

  本文關(guān)鍵詞：離體大鼠表皮干細(xì)胞熱損傷模型制作的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分 分離鑒定SD鼠表皮干細(xì)胞 目的對(duì)SD大鼠表皮干細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)，并對(duì)所培養(yǎng)表皮干細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞表面標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，以確保所培養(yǎng)的細(xì)胞群為富集了表皮干細(xì)胞的細(xì)胞群。 方法利用胰酶消化法分離大鼠表皮干細(xì)胞，Ⅳ型膠原差速貼壁法進(jìn)行篩選，克隆實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒定細(xì)胞增殖能力，，免疫熒光共染角蛋白19及β1整合素，聯(lián)合陰性標(biāo)記物角蛋白10，進(jìn)行表型鑒定。 結(jié)果倒置相差顯微鏡所得細(xì)胞形態(tài)多呈類(lèi)圓形、體積小、核大，增殖后期可見(jiàn)馬路石樣結(jié)構(gòu)。熒光檢測(cè)結(jié)果表明所細(xì)胞β1整合素及角蛋白19共表達(dá)，陰性標(biāo)記物角蛋白10無(wú)明顯表達(dá)�？寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)顯示所分離的細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖能力。 結(jié)論成功建立了獲得表皮干細(xì)胞體外分離的方法 第二部分 SD鼠離體表皮干細(xì)胞熱損傷模型建立 目的體外建立SD鼠ESCs熱損傷模型，研究皮膚燒傷后ESCs生物學(xué)變化。 方法體外培養(yǎng)大鼠表皮干細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在水浴鍋中分別以51、52、53、54℃孵育30s，對(duì)照組細(xì)胞37℃孵育30s，每組重復(fù)3次。用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行定量分析，熱損傷后干細(xì)胞內(nèi)HSP70蛋白表達(dá)量的變化通過(guò)免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HSP70mRNA的變化。 結(jié)果隨著熱損傷溫度的升高，表皮干細(xì)胞中凋亡和死亡細(xì)胞逐漸增加，細(xì)胞存活率逐漸下降；52℃時(shí)表皮干細(xì)胞存活率為85.2%，53℃時(shí)為83.7%，54℃存活率為53.2%。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示隨溫度升高HSP70表達(dá)量升高，53℃達(dá)到高峰，54℃時(shí)表達(dá)量開(kāi)始下降當(dāng)仍比對(duì)照組高。RTqPCR檢測(cè)結(jié)果顯示HSP70mRNA表達(dá)量在一定范圍內(nèi)隨溫度升高而增加，以53℃的HSP70mRNA表達(dá)量最為顯著（P0.05），而在54℃，55℃時(shí)表達(dá)量急劇下降并且與對(duì)照組相比顯著降低。 結(jié)論熱損傷能造成離體大鼠表皮干細(xì)胞凋亡，HSP70表達(dá)量在一定溫度范圍內(nèi)增高并為細(xì)胞提供保護(hù)作用，53℃孵育30s為構(gòu)建表皮干細(xì)胞熱損傷模型的較好條件。該模型可為后繼有關(guān)實(shí)驗(yàn)提供良好的研究平臺(tái)。
【關(guān)鍵詞】：克隆 角蛋白19 整合素β1 表皮干細(xì)胞 熱損傷 HSP70 細(xì)胞模型
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R-332
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 參考文獻(xiàn)10-11
• 第一部分 分離鑒定 SD 鼠表皮干細(xì)胞11-27
• 材料和方法11-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-22
• 討論22-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 第二部分 離體表皮干細(xì)胞熱損傷模型建立27-45
• 材料和方法27-35
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-40
• 討論40-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 全文總結(jié)45-46
• 文獻(xiàn)綜述46-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 成果目錄57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 鄧先見(jiàn);姚波;李力;徐苗苗;顧瑋;楊策;蔣建新;;大鼠表皮基底層干細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)[J];重慶醫(yī)學(xué);2013年21期

2 鐘清玲;劉德伍;劉繁榮;彭燕;張向榮;藍(lán)蔚;;糖尿病大鼠表皮干細(xì)胞及其增殖分化相關(guān)蛋白的研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2010年02期

  本文關(guān)鍵詞：離體大鼠表皮干細(xì)胞熱損傷模型制作的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：341941