柑橘(Citrus)是我國種植面積第一、產(chǎn)量第二的果樹,具有極高的經(jīng)濟價值。漆酶(Laccase)是一類含銅離子的糖蛋白氧化酶,在高等植物木質(zhì)素合成和抗逆境脅迫等方面發(fā)揮著重要的作用,具有廣闊的應(yīng)用前景。目前,柑橘漆酶的功能研究甚少,基因表達與調(diào)控機制還不清楚。本論文首先介紹了對甜橙(Citrussinensis)的漆酶基因家族進行生物信息學(xué)分析的結(jié)果,并克隆了兩個具有潛在抗逆功能基因的啟動子;其次描述了基于啟動子順式調(diào)控元件分析的qRT-PCR檢測結(jié)果,即該家族基因部分成員在不同組織和器官中的表達特性,以及不同逆境脅迫與激素處理下的表達特性;最后,分析了低溫脅迫下柑橘漆酶活力、可溶性蛋白及相對電導(dǎo)率的變化情況。主要研究結(jié)果如下:1.生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),在甜橙基因組中共有27個Laccase(CsLAC)基因家族成員,27個成員氨基酸序列相似性較低,且外顯子與內(nèi)含子間隔的結(jié)構(gòu)差異大,該家族基因的內(nèi)含子數(shù)目在2～5個之間,其基因結(jié)構(gòu)與編碼產(chǎn)物的理化性質(zhì)存在明顯差異;染色體定位表明它們在6號、7號及8號染色體上聚集,4號、5號及9號染色體上沒有漆酶基因的分布。依據(jù)編碼產(chǎn)物構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹表明...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１柑橘漆酶基因家族的染色體定位??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１．?Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｉｔｒｕｓ?ｓｉｎｅｎｓｉｓ?ｌａｃｃａｓｅ?ｇｅｎｅ?ｆａｍｉｌｙ??

圖２－１柑橘漆酶基因家族的染色體定位??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１．?Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｉｔｒｕｓ?ｓｉｎｅｎｓｉｓ?ｌａｃｃａｓｅ?ｇｅｎｅ?ｆａｍｉｌｙ??橘漆酶蛋白序列和糖基化位點分析??ＡＣ蛋白家族的氨基酸序列差異較大，長度變化在１３３？....

圖２－４柑橘和擬南芥漆酶蛋白的系統(tǒng)進化樹??

?１３２．９７?４．７０Ｅ－３９??ＣｓＬＡＣ氨基酸序列比對顯示出較低的序列相似性（附錄１）。然而，在每個ＣｓＬＡＣ成??員中觀察到不同的銅配體Ｌ１－Ｌ４特征序列（圖２－３）。結(jié)合銅離子的保守氨基酸序列位于??Ｌ１－Ｌ４保守區(qū)（圖２－３）。根據(jù)軸向配體類型的不同，ＣｓＬＡＣ可暫時....

圖２－６?ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳檢測??

２．２．９伏令夏橙漆酶基因啟動子ＰＣＲ擴增??使用ＣｓＵＣ７，?ＣｓＺＸＣＪ啟動子的引物進行ＰＣＲ擴增，將ＰＣＲ產(chǎn)物進行１％瓊脂糖??凝膠電泳檢測（圖２－７），擴增結(jié)果接近１５００ｂｐ，與預(yù)期相符，可進行測序。??Ｍ?１－１?１－２?１－３?２－１?２－２?２－３??２０００ｂｐ....

圖2-7CsLAC1,CsLAC3啟動子PCR擴增凝膠電泳

－－－２〇＿ｐ—??圖２－６?ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳檢測??Ｍ：?ＤＬ２０００ｍａｋｅｒ；?１－１￣１－３：伏令夏橙葉片基因組ＤＮＡ??Ｆｉｇｕｒｅ?２－６?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ＤＮＡ??Ｍ：?ＤＬ?２０００ｍａｋｅｒ；?１－....

本文編號：4028883