【目的】光作為一種環(huán)境信號,可影響植物的基因表達、酶活性和形態(tài)建成。光敏色素互作因子在光信號傳導過程中起著重要作用。本研究旨在構建水稻光敏色素互作因子OsPIL15的CRISPR/Cas9表達載體,創(chuàng)制OsPIL15突變體,挖掘水稻功能基因,豐富和完善水稻光信號調(diào)控分子機制�！痉椒ā恳罁�(jù)CRISPR/Cas9技術原理,設計OsPIL15突變靶點。將所設計靶序列在水稻基因組中進行比對,排除非特異性靶位點,同時使該靶序列含有常用酶切位點,方便后期突變體鑒定。化學合成靶位點寡核苷酸序列并與載體pBUN411連接構建CRISPR/Cas9表達載體,利用農(nóng)桿菌介導法導入粳稻品種日本晴,以除草劑抗性標記篩選獲得陽性轉(zhuǎn)基因植株。利用酶切法判斷T0代轉(zhuǎn)基因植株是否發(fā)生突變,結(jié)合測序結(jié)果分析突變單株的突變基因型。將靶點序列在水稻全基因組中進行比對分析,選擇5個與靶序列同源性較高且錯配在4 bp以內(nèi)的位點作為潛在脫靶位點進行脫靶效應評估,分析所設計靶序列特異性。【結(jié)果】所構建表達載體成功實現(xiàn)了對OsPIL15的定向編輯,酶切顯示在選取的25株T0代轉(zhuǎn)基因植株中獲得15株突變體,其中包括5株純合突變體、6株...

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【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 靶位點設計和CRISPR/Cas9表達載體構建
    1.3 酶切和測序分析驗證突變位點
    1.4 潛在脫靶位點分析
2 結(jié)果
    2.1 Os PIL15靶點設計和表達載體構建
    2.2 Os PIL15 T0代突變體篩選鑒定
    2.3 Os PIL15 T1代突變體分析鑒定
    2.4 ospil15突變體脫靶效應評估
    2.5 Os PIL15功能初步分析
3 討論
4 結(jié)論



本文編號：3863951