背景:侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最主要的死亡原因,乳腺癌和惡性黑色素瘤為常見高侵襲轉(zhuǎn)移性腫瘤。研究表明,抑癌基因PTEN突變或表達(dá)缺失顯著增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力,腫瘤微環(huán)境基質(zhì)細(xì)胞PTEN功能狀態(tài)同樣極大地影響著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移功能。荷瘤宿主整體PTEN降低或缺失是否會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)移癌的形成,迄今鮮有研究報(bào)道。目的:研究PTEN功能抑制或缺失對(duì)小鼠乳腺癌細(xì)胞和惡性黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的作用;研究荷瘤小鼠PTEN受抑時(shí)能否促進(jìn)乳腺癌和惡性黑色素瘤的增殖和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力。方法:采用PTEN特異性抑制劑VO-Ohpic處理小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞和惡性黑色素瘤B16細(xì)胞,MTT比色法和集落形成法檢測細(xì)胞的增殖活性,細(xì)胞劃痕愈合法和Transwell實(shí)驗(yàn)分別測定細(xì)胞的遷移及侵襲能力,流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞周期時(shí)相分布,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法和Western blotting法檢測PTEN基因及相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。BALB/c小鼠和C57BL/6J小鼠分別接種4T1細(xì)胞和B16細(xì)胞,分別建立小鼠乳腺癌、惡性黑色素瘤的原位移植瘤模型和轉(zhuǎn)移瘤模型,小...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 PTEN基因與惡性腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移
    1 PTEN基因的結(jié)構(gòu)與功能
        1.1 PTEN基因的結(jié)構(gòu)
        1.2 PTEN基因的功能
            1.2.1 抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡
            1.2.2 抑制細(xì)胞的粘附和遷移功能
            1.2.3 誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯
            1.2.4 抑制新生血管生成
            1.2.5 調(diào)控胚胎的正常發(fā)育
            1.2.6 其它
    2 PTEN基因相關(guān)的調(diào)控信號(hào)通路
        2.1 PTEN/Pl3K/AKT/mTOR信號(hào)通路
        2.2 PTEN/FAK/p130cas信號(hào)通路
        2.3 PTEN/ERK/MAPK信號(hào)通路
        2.4 其它信號(hào)通路
    3 PTEN基因與腫瘤細(xì)胞增殖
    4 PTEN基因與腫瘤細(xì)胞凋亡
    5 PTEN基因與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移
    6 PTEN基因與腫瘤耐藥性
    7 PTEN基因與腫瘤微環(huán)境
    8 小結(jié)與展望
第二章 PTEN抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 儀器與試劑
            2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.2 主要試劑與耗材
            2.1.3 常用緩沖液、試劑的配制及準(zhǔn)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物飼養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞增殖活性的檢測和觀察
                2.2.2.1 MTT法檢測4T1的增殖活性
                2.2.2.2 細(xì)胞集落形成法觀察細(xì)胞的增殖活性
            2.2.3 定量RT-PCR檢測PTEN基因的表達(dá)
                2.2.3.1 引物序列
                2.2.3.2 細(xì)胞內(nèi)總RNA抽提
                2.2.3.3 cDNA合成
                2.2.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測
            2.2.4 細(xì)胞侵襲和遷移檢測
                2.2.4.1 Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞的侵襲及遷移
                2.2.4.2 細(xì)胞劃痕法檢測細(xì)胞遷移
            2.2.5 FCM檢測細(xì)胞周期
            2.2.6 Western-blotting法測定相關(guān)蛋白的表達(dá)
                2.2.6.1 蛋白樣品制備
                2.2.6.2 BCA法對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量
                2.2.6.3 SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白
                2.2.6.4 轉(zhuǎn)膜
                2.2.6.5 封閉及抗體孵育
                2.2.6.6 ECL發(fā)光顯色及分析
            2.2.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 VO-Ohpic有效抑制乳腺癌4T1 細(xì)胞PTEN表達(dá)
        3.2 PTEN功能降低促進(jìn)乳腺癌4T1細(xì)胞的增殖
        3.3 抑制PTEN增強(qiáng)乳腺癌4T1細(xì)胞的遷徙和侵襲能力
        3.4 抑制PTEN可活化PI3K/AKT信號(hào)通路
        3.5 4T1細(xì)胞PTEN功能受抑促進(jìn)其在體內(nèi)的生長與轉(zhuǎn)移
        3.6 小鼠機(jī)體PTEN功能受抑促進(jìn)乳腺癌的生長與轉(zhuǎn)移
    4 討論
    小結(jié)
第三章 PTEN抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 儀器與試劑
            2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.2 主要試劑與耗材
            2.1.3 常用緩沖液、試劑的配制及準(zhǔn)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物飼養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞增殖活性的檢測和觀察
                2.2.2.1 MTT法檢測B16細(xì)胞的增殖活性
                2.2.2.2 結(jié)晶紫染色觀察B16細(xì)胞的增殖活性
            2.2.3 定量RT-PCR檢測PTEN基因的表達(dá)
                2.2.3.1 引物序列
                2.2.3.2 細(xì)胞內(nèi)總RNA抽提
                2.2.3.3 cDNA合成
                2.2.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測
            2.2.4 細(xì)胞侵襲和遷移檢測
                2.2.4.1 Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察B16 細(xì)胞的侵襲及遷移
                2.2.4.2 劃痕法檢測細(xì)胞遷移
            2.2.5 FCM檢測細(xì)胞周期
            2.2.6 WB法測定相關(guān)蛋白的表達(dá)
                2.2.6.1 蛋白樣品制備
                2.2.6.2 BCA法對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量
                2.2.6.3 SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白
            2.2.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 VO-Ohpic抑制小鼠惡性黑色素瘤B16 細(xì)胞PTEN表達(dá)
        3.2 PTEN功能降低促進(jìn)惡性黑色素瘤B16細(xì)胞的增殖
        3.3 抑制PTEN增強(qiáng)黑色素瘤B16細(xì)胞的遷徙和侵襲能力
        3.4 抑制PTEN可活化PI3K/AKT信號(hào)通路
        3.5 B16細(xì)胞PTEN受抑增強(qiáng)其在體內(nèi)的生長與轉(zhuǎn)移
        3.6 小鼠機(jī)體PTEN功能受抑增強(qiáng)惡性黑色素瘤的生長與轉(zhuǎn)移
    4 討論
    小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
攻讀學(xué)位期間完成的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3863992