本文關鍵詞：二甲雙胍調控Nrf2對非小細胞肺癌EGCG和放射敏感性的影響及機制研究

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【摘要】：第一部分:二甲雙胍增加非小細胞肺癌細胞A549對EGCG(表沒食子兒茶素沒食子酸酯)的敏感性目的研究二甲雙胍對非小細胞肺癌A549細胞表沒食子兒茶素沒食子酸脂(EGCG)敏感性的影響及其機制。方法首先利用MTT法和Western Blot法檢測不同非小細胞肺癌細胞株對EGCG的敏感性差異以及細胞株中HO-1表達水平的差異;采用MTT法檢測二甲雙胍能否增加EGCG對A549細胞生長抑制;采用細胞凋亡試劑盒和ROS檢測試劑盒明確二甲雙胍和EGCG對A549細胞凋亡和ROS水平的影響;分別采用Western Blot和免疫熒光檢測二甲雙胍和EGCG對HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影響及對Nrf2在細胞內亞分布的影響;通過分析基因芯片的結果和實時熒光定量PCR檢測25對肺癌和正常肺組織中HO-1的表達水平了解正常細胞和腫瘤細胞中HO-1表達的差異,并采用MTT法分析EGCG對A549和正常肺上皮BEAS-2B細胞的影響。采用裸鼠皮下接種A549細胞的方法建立A549細胞裸鼠移植瘤模型;二甲雙胍200μg/m L溶于飲用水給藥,EGCG 50mg/kg隔天腹腔注射給藥。采用游標卡尺測量裸鼠移植瘤的大小。采用免疫組化檢測裸鼠移植瘤中Nrf2水平的變化。結果四種不同的非小細胞肺癌細胞株中HO-1表達水平存在差異,A549中HO-1表達最高,同時A549對EGCG最為耐受。二甲雙胍能抑制A549細胞中HO-1的蛋白水平,并且這種抑制效果存在濃度依賴性,0.4mmol/L的二甲雙胍對A549生長沒有抑制效果,但是能顯著抑制HO-1的蛋白水平。0.4mmol/L的二甲雙胍能顯著增加EGCG對A549細胞的生長抑制,凋亡和ROS的水平。二甲雙胍能通過抑制Nrf2的細胞核分布降低HO-1的水平。最后通過分析基因芯片的結果發(fā)現(xiàn)相比于肺癌組織,正常肺上皮中HO-1水平明顯增高,且正常肺上皮BEAS-2B相比于A549對EGCG更為耐受。二甲雙胍能增加EGCG對A549裸鼠移植瘤的抑制作用。EGCG能增加裸鼠移植瘤中Nrf2的水平,二甲雙胍抑制EGCG增加Nrf2的效應。結論本研究表明,二甲雙胍能抑制A549細胞中HO-1的蛋白水平,并且能通過誘導凋亡和ROS的產生增加EGCG對A549生長的抑制。二甲雙胍能夠通過抑制細胞核內的Nrf2水平減少HO-1的水平。此外,正常肺上皮和肺癌中HO-1的表達存在差異,因此對EGCG的敏感性不同。二甲雙胍聯(lián)合EGCG可以為臨床腫瘤治療提供了一個新方案。第二部分二甲雙胍對非小細胞肺癌細胞A549細胞放射敏感性的影響和機制研究目的研究二甲雙胍對非小細胞肺癌A549細胞放射敏感性的影響及其機制。方法采用克隆形成法檢測二甲雙胍和X射線對A549克隆形成的影響;采用PI法檢測二甲雙胍和X射線對A549細胞周期的影響;采用細胞凋亡試劑盒檢測二甲雙胍和X射線對A549細胞凋亡的影響;分別采用Western Blot和免疫熒光檢測二甲雙胍和X射線對HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影響及對Nrf2在細胞內亞分布的影響。結果二甲雙胍能抑制X射線對A549細胞克隆形成的抑制能力;二甲雙胍能抑制S期細胞的比例,同時減少X射線誘導的G2/M期阻滯;二甲雙胍能減少X射線導致的Nrf2細胞核轉位。結論本研究表明,二甲雙胍能增加X射線抑制A549細胞克隆形成的能力,并且能通過改變A549的細胞周期并減少X射線誘導的G2/M期阻滯。此外,二甲雙胍能夠通過抑制X射線誘導的Nrf2細胞核轉位抑制Nrf2信號通路。二甲雙胍聯(lián)合X射線可以為臨床腫瘤治療提供了一個新方案。
【關鍵詞】：二甲雙胍(metformin) 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG) NF-E2相關因子2(Nrf2) 血紅素加氧酶-1(HO-1) 非小細胞肺癌(NSCLC) 二甲雙胍(metformin) NF-E2相關因子2(Nrf2) 非小細胞肺癌 放射敏感性
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-17
• 參考文獻12-17
• 第一部分二甲雙胍增加表沒食子兒茶素沒食子酸酯對非小細胞肺癌細胞A549 的敏感性17-50
• 一、材料17-22
• 二、方法22-29
• 三、結 果29-46
• 四、討論46-48
• 參考文獻48-50
• 第二部分 二甲雙胍對非小細胞肺癌細胞A549 細胞放射敏感性的影響和機制研究50-63
• 一、材料與方法51-52
• 二、結 果52-59
• 三、討論59-60
• 參考文獻60-63
• 本文研究結果及結論63
• 展望63-64
• 綜述 NRF2 介導的抗氧化反應的分子機制64-92
• 參考文獻79-92
• 縮略詞表92-93
• 攻讀學位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文93-94
• 致謝94-96

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張瑜,鄒國林,彭少君;表沒食子兒茶素沒食子酸酯研究進展[J];氨基酸和生物資源;1998年04期

2 鄒小農;;中國肺癌流行病學[J];中華腫瘤防治雜志;2007年12期

3 房娟;柏茂樹;申靜;伍治平;王熙才;;中藥抗肺癌實驗研究進展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2011年10期

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本文編號：740455