本文關(guān)鍵詞：FBW7、MCL1在肺腺癌紫杉醇耐藥性中的表達(dá)差異及作用

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【摘要】：背景肺癌是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的惡性腫瘤之一,也是目前全世界發(fā)病率和死亡率最高的癌癥之一。據(jù)國(guó)家衛(wèi)生部公布的《全國(guó)第三次死因調(diào)查》報(bào)告[1],肺癌已替代肝癌成為我國(guó)惡性腫瘤死亡原因第一位(約占全部惡性腫瘤致死的22.7%)。目前治療肺癌的手段仍以手術(shù)、化療和放療為主。肺癌包括了非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)兩大類(lèi),而占肺癌80%的非小細(xì)胞肺癌的患者中[2],有65%-80%的NSCLC患者確診時(shí)已屬局部晚期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,錯(cuò)失手術(shù)機(jī)會(huì),因此放、化療是晚期NSCLC患者的主要治療手段。其中紫杉醇類(lèi)藥物不僅可與鉑類(lèi)藥物聯(lián)用作為一線治療,更值得關(guān)注的是,多西紫杉醇被認(rèn)為是非小細(xì)胞肺癌二線治療的金標(biāo)準(zhǔn)。然而耐藥的產(chǎn)生極大地限制了其臨床療效。因此,要想進(jìn)一步改善患者的生存期和生活質(zhì)量,一方面,需要提高紫杉醇類(lèi)藥物的敏感性,探索其藥物效應(yīng)預(yù)測(cè)因子,實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療,最大限度地避免耐藥;另一方面,不斷探索新的治療靶點(diǎn)亦是NSCLC治療的主要方向。紫杉醇(paclitaxel,PTX)是從植物紅豆杉的葉子中提取到的堿性物質(zhì),研究表明PTX有很好的抗腫瘤藥理活性,但是PTX耐藥的產(chǎn)生限制了其臨床應(yīng)用。髓細(xì)胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCL1)是Bcl-2家族的一個(gè)新成員,在凋亡調(diào)控中具有重要作用[3],F-盒和含蛋白7的WD重復(fù)結(jié)構(gòu)域(F-box and WD repeat domain-containing protein7,FBW7)是一種腫瘤抑制蛋白,其基因突變或表達(dá)降低可造成多種腫瘤的發(fā)生[4],本文通過(guò)檢測(cè)肺癌細(xì)胞A549及A549/T中FBW7和MCL1的蛋白質(zhì)水平和m RNA水平與紫杉醇類(lèi)藥物敏感性的關(guān)系,探討FBW7和MCL1作為紫杉醇類(lèi)藥物效應(yīng)預(yù)測(cè)因子的潛在價(jià)值,為臨床個(gè)體化治療提供指引。目的觀察PTX作用于人肺腺癌A549細(xì)胞和A549/T細(xì)胞后,對(duì)細(xì)胞增殖的影響,以及MCL1和FBW7蛋白和m RNA的表達(dá)水平,來(lái)研究PTX抑制肺癌增殖以及耐藥的相關(guān)機(jī)制。方法1、PTX對(duì)細(xì)胞增殖的影響:不同濃度的PTX作用于人肺腺癌A549和A549/T兩種細(xì)胞于不同的時(shí)間,應(yīng)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖抑制率。2、PTX對(duì)A549及A549/T兩種細(xì)胞中MCL1、FBW7m RNA表達(dá)的影響:不同濃度PTX作用A549及A549/T兩種細(xì)胞后,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)來(lái)檢測(cè)A549及A549/T兩種細(xì)胞中MCL1、FBW7的m RNA表達(dá)。3、比較A549及A549/T細(xì)胞中MCL1、FBW7蛋白表達(dá)情況:通過(guò)采用MCL1、FBW7抗體進(jìn)行細(xì)胞免疫組化技術(shù),檢測(cè)A549及A549/T兩種細(xì)胞中MCL1、FBW7蛋白表達(dá)。4、PTX對(duì)A549及A549/T兩種細(xì)胞中MCL1、FBW7蛋白表達(dá)的影響:不同濃度的PTX作用于A549及A549/T兩種細(xì)胞后,應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)MCL1、FBW7蛋白的表達(dá)。結(jié)果1、PTX對(duì)細(xì)胞增殖的影響:不同時(shí)間、不同濃度PTX作用A549及A549/T兩種細(xì)胞后,能抑制細(xì)胞的增殖,且呈時(shí)間-濃度依賴性(P0.05),但是耐藥細(xì)胞A549/T的藥物濃度明顯高于不耐藥細(xì)胞A549的。2、PTX對(duì)A549及A549/T兩種細(xì)胞中MCL1、FBW7m RNA表達(dá)的影響:不同濃度PTX作用A549及A549/T兩種細(xì)胞后,q PCR顯示A549MCL1m RNA表達(dá)下調(diào),FBW7m RNA表達(dá)上調(diào),而耐藥細(xì)胞對(duì)此濃度無(wú)明顯變化。3、比較A549及A549/T細(xì)胞中MCL1、FBW7蛋白表達(dá)情況:應(yīng)用細(xì)胞免疫組化技術(shù),檢測(cè)出A549細(xì)胞中MCL1蛋白的表達(dá)低于及A549/T細(xì)胞的,而A549細(xì)胞中FBW7蛋白的表達(dá)高于A549/T。4、PTX對(duì)A549及A549/T兩種細(xì)胞中MCL1、FBW7蛋白表達(dá)的影響:不同濃度的PTX作用于A549及A549/T兩種細(xì)胞后,western顯示A549細(xì)胞中MCL1蛋白表達(dá)下調(diào),FBW7蛋白表達(dá)上調(diào),耐藥細(xì)胞對(duì)此濃度無(wú)明顯變化。結(jié)論1、PTX能抑制人肺腺癌A549及A549/T細(xì)胞的增殖,但對(duì)于A549/T細(xì)胞所需要的紫杉醇濃度顯著高于A549細(xì)胞的。2、不同濃度PTX作用于A549細(xì)胞后,FBW7表達(dá)上調(diào),而MCL1表達(dá)下調(diào),但相同的濃度作用于A49/T細(xì)胞后FBW7及MCL1的表達(dá)無(wú)明顯變化。3、在耐紫杉醇的細(xì)胞中FBW7表達(dá)下降而Mcl-1高表達(dá),這提示與紫杉醇的耐藥可能有關(guān),但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：紫杉醇 肺癌 耐藥性 MCL1 FBW7
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 1 前言13-16
• 2 材料與方法16-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-35
• 3.1 A549 及A549/T細(xì)胞對(duì)紫杉醇的體外敏感性不同31-32
• 3.2 PTX對(duì)A549 及A549/T兩種細(xì)胞中MCL1、FBW7MRNA表達(dá)的影響32-33
• 3.3 比較A549 及A549/T細(xì)胞中MCL1、FBW7 蛋白表達(dá)情況33
• 3.4 PTX調(diào)節(jié)MCL1、FBW7 蛋白的表達(dá)33-35
• 4 討論35-38
• 5 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述 紫杉醇耐藥的研究進(jìn)展43-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 主要縮略詞表55-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文56-57
• 致謝57-58

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王潔;;晚期非小細(xì)胞肺癌化療進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

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本文編號(hào)：710551