研究背景及目的:腫瘤微環(huán)境作為腫瘤細胞存續(xù)的外環(huán)境,是影響腫瘤細胞生物學行為的關鍵因素。腫瘤中的肌成纖維細胞,也稱腫瘤相關成纖維細胞（Cancerassociated fibroblast,CAF）是腫瘤微環(huán)境的主要間質(zhì)細胞,在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。我們發(fā)現(xiàn),Musashi2（MSI2）在腫瘤相關成纖維細胞中高表達,并與CAF介導的腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關。本研究擬探究肌成纖維細胞中MSI2影響肝癌進展的作用及相關分子機制。研究方法:天狼星紅、免疫組化和免疫熒光染色觀察腫瘤組織中膠原沉積以及α-SMA和MSI2表達與共定位情況;通過Cre-LoxP系統(tǒng)構(gòu)建敲除肌成纖維細胞Msi2的基因鼠;通過密度梯度離心分離小鼠原代肝星狀細胞,體外誘導激活成肌成纖維細胞;利用原代肌成纖維細胞條件培養(yǎng)基處理肝癌細胞,確定體外肌成纖維細胞對腫瘤細胞生物學行為的影響。CCl4灌胃誘導小鼠肝纖維化后構(gòu)建肝原位移植瘤模型,觀察條件敲除肌成纖維細胞和/或肝癌細胞MSI2對腫瘤進展的影響;通過RNA測序分析Msi2基因?qū)Τ衫w維細胞相關基因表達的影響;通過Kaplan Meier生存曲線分析腫瘤膠原沉積對肝癌患者預... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２腫瘤膠原沉積與肝癌（Ｘ－ＳＭＡ表達正相關??

?博士學位論文???物表達上調(diào)（圖１－６）。收集體外培養(yǎng)不同時間，激活程度不同的小鼠原代肝星狀細胞，實時??定量ＰＣＲ檢測發(fā)現(xiàn)，隨著小鼠原代肝星狀細胞的激活（ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ表達上調(diào)），Ｍｓｉ２??表達上調(diào)（圖１－７Ｂ）；免疫熒光檢測同樣顯示，Ｍｓｉ２在肝星狀細胞激活為肌成纖維細胞（激??活肝星狀細胞）的過程中表達上調(diào)（圖１－７Ａ）。此夕卜，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測體外培養(yǎng)不同時間的??肝星狀細胞Ｍｓｉ２、ａ－ＳＭＡ、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ蛋白表達，結(jié)果同樣表明，隨著體外培養(yǎng)激活，Ｍｓｉ２??表達上調(diào)，并且也可見成纖維細胞標志物ａ－ＳＭＡ、Ｈｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表達上調(diào)（圖１－８）。證實ＭＳＩ２??在激活的肝星狀細胞（既肌成纖維細胞）中表達上調(diào)。??Ｄａｙ１?Ｄａｙ７??Ｉ?你?二??｜?＃?咿??圖１－６分離的原代肝星狀細胞體外培養(yǎng)激活成肌成纖維細胞??Ｆｉｇｕｒｅ?１－６?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｐｒｉｍａｉｙ?ｈｅｐａｔｉｃ?ｓｔｅｌｌａｔｅ?ｃｅｌｌ?ａｃｔｉｖａｔｅ?ａｓ?ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｃｕｌｔｕｒｅ??左圖為分離的小鼠原代肝星狀細胞貼壁后ｉ天，可見細胞呈不規(guī)則圓形，并含有較多脂滴；右圖為分離??的小鼠原代肝星狀細胞體外培養(yǎng)７天，成為激活的肝星狀細胞（肌成纖維細胞），其細胞內(nèi)脂滴明顯減少消??失，細）肺嫩化，呈長梭形。??Ａ?Ｂ?＾?Ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｒｙ?ＨＳＣ??？２??Ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｒｙ?ＨＳＣ?塞６?ｐ??■ＳＢ?ｒｌＪｌｌ??Ｍｓｉ２?ｑ－ＳＭＡ?Ｃｏｌ１ａ１??口?Ｄ１?￣Ｃ３Ｄ３￣Ｈ１Ｄ７??口?Ｄ５?ＨＤ１０??閣ｌ－７小

?博士學位論文???可見檢測到明顯的Ｍｓｉ２與ａ－ＳＭＡ表達；Ｂ實時定量ＰＣＲ檢測不同培養(yǎng)天數(shù)的小鼠肝原代星狀細胞Ｍｓｉ２、??ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ的表達’結(jié)果顯示，隨著小鼠原代肝星狀細胞體外培養(yǎng)天數(shù)增加，細胞向肌成纖維細胞表??型變化：ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ表達上調(diào)，并伴Ｍｓｉ２表達上調(diào)。??Ｐｒｉｍａｒｙ?ｍｏｕｓｅ?ＨＳＣｓ??Ｄａｙ?１?３?５?７?９??Ｍｓｉ２?？?？??ｆｎ｜??ａ－ＳＭＡ?？??｜３－ａｃｔｉｎ?ｍｂ??圖１－８小鼠原代肝星狀細胞體外培養(yǎng)激活成成纖維細胞，并伴ＭＳＩ２表達上調(diào)??Ｆｉｇｕｒｅ?卜８?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｉｙ?ＨＳＣ?ａｃｔｉｖａｔｅ?ａｓ?ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ?ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ?ｗｉｔｈ?ＭＳＩ２?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ結(jié)果顯示小鼠原代肝星狀細胞培養(yǎng)成為成纖維細胞后出現(xiàn)ＭＳ１２表達上調(diào)。??１．２．５?ＭＳＩ２在腫瘤相關成纖維細胞中高銳??此外，我們還通過免疫熒光共染，檢測了人肝癌組織切片中的肌成纖維細胞和由人肝癌??組織中分離的原代肌成纖維細胞（腫瘤相關成纖維細胞）中的ＭＳＩ２表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在??ａ－ＳＭＡ陽性的肌成纖維細胞中存在較高水平的ＭＳＩ２表達（圖１－９?Ａ和Ｂ）。??Ａ?Ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ?Ｂ?ＣＡＦ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｈｕｍａｎ?ＨＣＣ?ｔｉｓｓｕｅｓ??圖１－９?ＭＳＩ２在腫瘤相關成纖維細胞中高表達??Ｆｉｇｕｒｅ?１?－９?ＭＳＩ２?ｏｖｅｒ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｉｎ?ｔｕｍｏｒ?ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ??Ａ肝癌

【參考文獻】：
期刊論文
[1]分子靶向藥物與免疫檢查點抑制劑治療晚期肝細胞癌的研究現(xiàn)狀與進展[J]. 劉琳,秦叔逵.  臨床腫瘤學雜志. 2019(09)



本文編號：3541963