發(fā)布時間：2021-12-02 20:23

　　目的:研究天然小分子化合物N-trans-feruloyloctopamine（FO）對人肝癌細胞系Huh7和HCCLM3細胞增殖、遷移及侵襲的影響,探討FO抑制肝癌細胞生長的作用靶點及調(diào)控的關(guān)鍵機制。方法:體外培養(yǎng)肝癌Huh7和HCCLM3細胞,采用CCK-8試劑盒檢測不同濃度FO對人肝癌細胞Huh7和HCCLM3增殖能力的抑制作用,確定IC50;采用細胞劃痕實驗和Transwell實驗觀察FO對Huh7和HCCLM3細胞遷移及侵襲能力的影響;通過Western Blot檢測FO干預(yù)后Huh7和HCCLM3細胞中AKT、p38 MAPK、ERK1/2、p65的表達水平的影響,并進一步分析FO對人肝癌細胞EMT通路中關(guān)鍵蛋白Slug、Snail、N-cadherin、E-cadherin表達水平變化。用流式細胞術(shù)檢測FO干預(yù)對細胞凋亡的影響;利用RNA-seq技術(shù)篩選FO干預(yù)后肝癌細胞中的差異基因,用DAVID生物信息學(xué)工具對差異基因進行GO和KEGG富集分析,進一步明確差異基因調(diào)節(jié)的功能和信號通路,結(jié)合GO和KEGG分析數(shù)據(jù),篩選出FO調(diào)節(jié)的潛在靶基因。結(jié)果:1.細胞活性實驗:不同濃... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【圖文】：

FO的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文香蘭素衍生物通過PI3K-AKT、Apoptosis通路對人肝癌細胞增殖、侵襲和凋亡的影響的研究161.2.7統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)據(jù)用SPSS15.0、GraphpadPrism5.01進行統(tǒng)計學(xué)處理。各實驗都進行三次重復(fù)驗證，實驗內(nèi)設(shè)置復(fù)孔，實驗組與對照組進行獨立t檢驗和差異性分析，p＜0.05視為具有差異性，p＜0.01視為顯著差異。1.3實驗結(jié)果1.3.1FO的藥效及IC50的測定為了檢驗FO對肝癌細胞的藥效，我們采用了細胞活性實驗檢測了FO對Huh7和HCCLM3細胞活力的影響。用不同濃度FO（0mΜ、0.1mΜ、0.5mΜ、1mΜ、2mΜ、4mΜ、10mΜ、20mΜ、50mΜ）分別干預(yù)肝癌細胞48h。結(jié)果如圖1-3-1所示，我們發(fā)現(xiàn)FO以濃度依賴性的方式抑制肝癌細胞增殖，F(xiàn)O濃度越高肝癌細胞活性就越低。通過細胞存活率的計算，我們得到了FO在肝癌細胞Huh7和HCCLM3的半抑制濃度分別為：2.00mM、2.27mM;圖1-3-1驗證不同濃度FO（0mΜ、0.1mΜ、0.5mΜ、1mΜ、2mΜ、4mΜ、10mΜ、20mΜ、50mΜ）對肝癌細胞Huh7和HCCLM3干預(yù)48h后，對細胞活力的影響(此實驗用5-Fu作為對照，檢測FO的藥效)1.3.2FO對人肝癌細胞增殖能力的影響根據(jù)CCK-8實驗所得到的結(jié)果，我們選定了FO的IC50濃度作為后續(xù)實驗的干預(yù)濃度。我們分別對Huh7和HCCLM3進行FO（2.00mM、2.27mM）干預(yù)不同時間（24h、48h、72h）。結(jié)果如圖1-3-2所示，與對照組相比，F(xiàn)O處理組Huh7和HCCLM3細胞的增殖明顯受到抑制，且作用時間越長，抑制越明顯。

-2FO對肝癌細胞增殖能力的影響

【參考文獻】：
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本文編號：3529143