發(fā)布時(shí)間：2021-11-24 02:36

　　目的:食管癌是消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,中國(guó)是食管癌的高發(fā)區(qū),放療是食管癌標(biāo)準(zhǔn)治療方法之一,但放射抗性始終是限制放療療效提升的重要瓶頸。我們前期研究發(fā)現(xiàn)NRAGE可能通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與食管鱗癌放射抗性的形成。但這些研究都是建立在2D平面培養(yǎng),無(wú)法真實(shí)模擬人體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境。3D細(xì)胞培養(yǎng)是一種模擬體內(nèi)組織細(xì)胞立體生長(zhǎng)的體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),然而目前對(duì)于應(yīng)用3D生物打印技術(shù)構(gòu)建食管癌細(xì)胞模型的研究尚無(wú)報(bào)道。本研究借助3D細(xì)胞打印技術(shù),以明膠、海藻酸鈉和食管癌細(xì)胞混合物為打印材料,構(gòu)建了可模擬體內(nèi)腫瘤微環(huán)境的3D食管癌細(xì)胞模型,并與2D平面培養(yǎng)細(xì)胞模型比較,檢測(cè)兩種模式下,食管癌細(xì)胞增殖的情況。在兩種培養(yǎng)模式下,研究過(guò)表達(dá)NRAGE對(duì)食管癌細(xì)胞增殖和放射抗性的作用。方法:1. 利用3D細(xì)胞打印技術(shù),將人食管癌細(xì)胞/明膠/海藻酸鈉構(gòu)建3D食管癌細(xì)胞模型。2. 采用鈣黃綠素-AM和碘化丙啶溶液對(duì)3D食管癌細(xì)胞模型進(jìn)行活/死細(xì)胞雙熒光染色,評(píng)價(jià)打印后細(xì)胞的存活率。3.顯微鏡下觀察打印后1,7,14天的模型結(jié)構(gòu),并通過(guò)HE染色觀察打印后7,14,21天3D食管癌細(xì)胞模型的細(xì)... 

【文章來(lái)源】：河北醫(yī)科大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞模型（a為3D細(xì)胞模型示意圖；b為3D細(xì)胞模型外觀）

18B圖23D食管癌細(xì)胞支架Eca109與Eca109/NRAGE細(xì)胞的存活率Fig.2SurvivalrateofEca109andEca109/NRAGEcellsinthree-dimensionalesophagealmodelby3Dprinting(*P<0.05)3.3D食管癌細(xì)胞模型的形態(tài)倒置顯微鏡觀察3D食管癌細(xì)胞支架形態(tài)，連續(xù)觀察21天。結(jié)果顯示：打印后第1天，兩種3D細(xì)胞支架呈多層網(wǎng)格狀，腫瘤細(xì)胞多分布在支架內(nèi)部，且分布均勻，如圖3a，圖3d；隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，一周后細(xì)胞呈球形生長(zhǎng)，如圖3b，圖3e；培養(yǎng)14天之后，球形向支架邊緣生長(zhǎng)并發(fā)生了脫落現(xiàn)象，如圖3c，圖3f；在培養(yǎng)期間，天然明膠在培養(yǎng)基中通過(guò)水解逐漸降解，為腫瘤細(xì)胞的成團(tuán)生長(zhǎng)提供了空間，尤其是Eca109/NRAGE組這一現(xiàn)象更明顯，如圖3c，3f。為了深入觀察3D腫瘤細(xì)胞模型中的具體形態(tài)，進(jìn)一步做了HE染色。結(jié)果顯示：培養(yǎng)第7天，細(xì)胞成團(tuán)生長(zhǎng)，且均勻分布在模型中，兩組細(xì)胞團(tuán)中的細(xì)胞核較大，不規(guī)則，胞漿比例失調(diào)，且相對(duì)于親本細(xì)胞Eca109，過(guò)表達(dá)NRAGE的Eca109/NRAGE細(xì)胞有明顯的成團(tuán)增長(zhǎng)的趨勢(shì)；培養(yǎng)第14天和第21天，細(xì)胞團(tuán)塊繼續(xù)增殖變大，同時(shí)形成了簡(jiǎn)單的立體結(jié)構(gòu)，如圖4。

19圖3光學(xué)顯微鏡下觀察3D食管癌模型Eca109與Eca109/NRAGE細(xì)胞形態(tài)(a-c:Eca109組在第1,7,14天的形態(tài),d-f:Eca109/NRAGE組第1,7,14天的形態(tài))(100×)Fig.3MorphologyofesophagealcarcinomacellEca109andEca109/NRAGEinthree-dimensionalcellmodelunderopticalmicroscope(a-c:morphologyofEca109groupon1st,7thand14thday;d-f:morphologyofEca109/NRAGEgroupon1st,7thand14thdayunderopticalmicroscope)(100×)圖4HE染色觀察3D食管癌細(xì)胞模型Eca109和Eca109/NRAGE組第7,14和21天的形態(tài)(100×)Fig.4H&EstainingofEca109andEca109/NRAGEcellsinthree-dimensionalmodelat7th,14th,21stday(100×)4.掃描電鏡下觀察結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]基于細(xì)胞3D打印技術(shù)的腫瘤藥物篩選細(xì)胞芯片研究[D]. 趙占盈.杭州電子科技大學(xué) 2014
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本文編號(hào)：3515094