發(fā)布時間：2018-06-12 20:12

  本文選題：乳腺癌 + miR-29b��； 參考：《南昌大學》2016年博士論文

【摘要】：乳腺癌(Breast Cancer)是一種女性惡性腫瘤,對患者身心產生巨大傷害。目前對于造成乳腺癌患者死亡的具體原因機制并不清楚。在腫瘤等多種疾病中,微小RNA(microNRA,miRNA)具有重要的功能,miRNA既可作為抑癌基因也可作為致癌基因,從而在腫瘤發(fā)生發(fā)展的全過程中發(fā)揮不同的作用,同時miRNA自身也可以發(fā)生突變或缺失等現(xiàn)象,進而影響相關基因的表達發(fā)生異常。對miRNA進行分析,可發(fā)現(xiàn)多種miRNA與生命活動關鍵蛋白和信號通路的調節(jié)有關,通過對這些蛋白和通路進行研究,可了解miRNA發(fā)揮的作用的具體機制。而乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與轉移等過程是由許多miRNA信號分子調控的,通過上述通路調節(jié)的研究,我們可以得出miRNA在乳腺癌中的的作用,從而為乳腺癌的前期診斷和后期治療提供一些新的思路和方法。miR-29b作為miRNA中的成員之一,參與了多種腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡、侵襲和轉移過程。miR-29b已成為與腫瘤診斷、治療和預后相關的具有潛在價值的腫瘤標志物。然而,miR-29b在乳腺癌中的作用目前尚未明確,因此,研究miR-29b在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其作用靶點的探討十分具有意義。目的:探討微小RNA-29b(miRNA-29b)在乳腺癌組織和細胞中的表達水平,分析miRNA-29b的表達與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)及預后的相關性,觀察miRNA-29b對乳腺癌細胞周期、增殖、凋亡和遷移的影響,生物信息學預測miRNA-29b的靶基因,并初步探討其可能的作用機制。方法:采用實時熒光定量PCR的方法檢測miR-29b在乳腺癌細胞株和乳腺癌患者癌組織中的表達,采用總RNA提取試劑盒提取新鮮冰凍組織及細胞株中總RNA,使用PrimeScript RT試劑盒反轉錄法合成cDNA,ABI 7500熒光定量PCR儀進行PCR反應;采用統(tǒng)計分析法對乳腺癌癌組織中mi R-29b水平與患者臨床病理參數(shù)進行相關性分析。CCK8法和細胞劃痕實驗分別檢測過表達mi R-29b后乳腺癌細胞增殖和遷移,流式細胞術檢測乳腺癌細胞的細胞周期和凋亡情況。通過TargetScan和miRanda等靶基因預測數(shù)據(jù)庫對miR-29b的靶基因進行預測,分析miR-29b過表達與HER-2表達的相關性,研究miR-29b過表達對HER-2蛋白的影響,Western blotting檢測過表達miR-29b的乳腺癌細胞中HER-2的表達,初步驗證miR-29b的作用靶點。結果:miR-29b在乳腺癌組織和乳腺癌細胞中的表達顯著下調;miR-29b過表達能夠抑制乳腺癌細胞的增殖,促進起凋亡,并減弱其遷移和侵襲能力(P0.01);miR-29b與HER-2存在直接靶向負作用關系,乳腺癌患者癌組織中mi R-29b的表達水平與患者年齡和浸潤程度之間無顯著相關性(P0.05),而與患者乳腺癌組的腫瘤大小和HER-2及淋巴結轉移有顯著相關性(P0.01),乳腺癌患者的預后與乳腺癌組織中miR-29b的表達有很明顯的關系:miR-29b表達越低,患者預后越差(P0.01)
[Abstract]:Breast Cancer (Breast Cancer) is a female malignant tumor that causes great damage to the body and mind of patients. The specific causes of breast cancer deaths are unclear. In many diseases, such as tumor, microRNAs have important function: miRNAs can be used as tumor suppressor gene and oncogene, so they play different roles in the whole process of tumorigenesis and development. At the same time, miRNA itself can be mutated or deleted, thus affecting the abnormal expression of related genes. Through the analysis of miRNA, we can find that many miRNAs are related to the regulation of vital proteins and signaling pathways. Through the study of these proteins and pathways, we can understand the specific mechanism of miRNA's action. However, the development and metastasis of breast cancer are regulated by many miRNA signaling molecules. Through the study of the regulation of these pathways, we can conclude the role of miRNA in breast cancer. As a member of miRNA, miR-29b is involved in the proliferation, differentiation, apoptosis, invasion and metastasis of many kinds of tumor cells. A potentially valuable tumor marker associated with treatment and prognosis. However, the role of miR-29b in breast cancer is not clear, so it is of great significance to study the role and target of miR-29b in the development of breast cancer. Objective: to investigate the expression level of miRNA-29b in breast cancer tissues and cells, analyze the relationship between miRNA-29b expression and clinicopathological parameters and prognosis of breast cancer patients, and observe the effect of miRNA-29b on cell cycle, proliferation, apoptosis and migration of breast cancer. The target gene of miRNA-29b was predicted by bioinformatics and its possible mechanism was discussed. Methods: the expression of miR-29b in breast cancer cell line and breast cancer tissue was detected by real-time fluorescent quantitative PCR. Total RNA extraction kit was used to extract total RNAs from fresh frozen tissues and cell lines. CDNAABI 7500 was synthesized by reverse transcription of primeScript RT kit for PCR reaction. The correlation between the expression of mi R-29b and the clinicopathological parameters of breast cancer tissues was analyzed by statistical analysis. The proliferation and migration of breast cancer cells after overexpression of mi R-29b were detected by CCK8 method and cell scratch assay. Cell cycle and apoptosis of breast cancer cells were detected by flow cytometry. The target gene of miR-29b was predicted by target gene prediction database such as TargetScan and miRanda. The correlation between the overexpression of miR-29b and HER-2 expression was analyzed. The effect of overexpression of miR-29b on HER-2 protein was studied. The expression of HER-2 in breast cancer cells with miR-29b overexpression was detected by Western blotting. The action target of miR-29b was preliminarily verified. Results the overexpression of miR-29b in breast cancer tissues and breast cancer cells significantly down-regulated the expression of miR-29b, which could inhibit the proliferation of breast cancer cells, promote apoptosis, and weaken the migration and invasion ability of human breast cancer cells. There was a direct and negative relationship between the expression of miR-29b and HER-2 in breast cancer tissues and breast cancer cells. There was no significant correlation between the expression of mi R-29b in breast cancer tissue and age and degree of invasion (P 0.05), but a significant correlation with tumor size, HER-2 and lymph node metastasis in patients with breast cancer (P 0.01). The lower the expression of miR-29b, the lower the expression of miR-29b in breast cancer. The worse the prognosis was (P0.01)
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：2010920