本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞自噬對腺花素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞死亡的影響

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【摘要】：細(xì)胞自噬(autophagy)指自身細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)包括衰老的細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)成分以及長壽命蛋白通過雙層膜樣囊泡結(jié)構(gòu)包裹、運(yùn)送至溶酶體發(fā)生降解的過程。自噬廣泛存在于真核細(xì)胞的生命活動(dòng)中,在適應(yīng)代謝應(yīng)激、保持基因組完整性及維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面發(fā)揮重要作用。一系列研究顯示,自噬參與細(xì)胞死亡的發(fā)生與發(fā)展過程,其對細(xì)胞死亡的影響可能為促進(jìn)、阻礙或無影響。最近,課題組在國際上首次報(bào)道,腺花素(Adenanthin),一種從腺花香茶菜葉子中提取的天然二萜類化合物,通過抑制過氧化還原酶I/II(peroxiredoxin I/II)活性,引起細(xì)胞內(nèi)ROS累積從而選擇性的誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)細(xì)胞死亡。目前的研究發(fā)現(xiàn),ROS的累積通常能增強(qiáng)細(xì)胞的自噬活性,故本研究主要關(guān)注自噬在腺花素誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞死亡中的作用。通過Western blot和免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn),腺花素能夠顯著增強(qiáng)HCC細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞的自噬活性,表現(xiàn)為自噬重要標(biāo)志分子LC3-II蛋白的明顯累積、GFP-LC3和內(nèi)源性LC3蛋白的聚集并呈現(xiàn)明顯的點(diǎn)狀分布于細(xì)胞漿內(nèi)。利用RNA干預(yù)技術(shù)沉默Beclin-1基因的表達(dá)并不影響腺花素誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬活性增強(qiáng)效應(yīng),同時(shí)也不影響腺花素引發(fā)的細(xì)胞死亡過程,提示腺花素誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞自噬活性增強(qiáng)為非Beclin-1依賴的。進(jìn)一步地,CCK-8結(jié)果顯示,與野生型小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(WT MEFs)相比,ATG5缺失(ATG5-/-)的MEF細(xì)胞對于腺花素誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制效應(yīng)更為抵抗;同樣地,利用小RNA干預(yù)Bel-7402細(xì)胞中ATG5基因的表達(dá),也明顯拮抗腺花素誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制效應(yīng),這些結(jié)果提示,腺花素增強(qiáng)的細(xì)胞自噬活性,能夠促進(jìn)其誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞死亡效應(yīng)。隨著這些工作的開展,我們將深入認(rèn)識(shí)腺花素選擇性殺傷HCC細(xì)胞的潛在作用機(jī)制,并且為特異性靶向和殺傷腫瘤細(xì)胞的治療策略提供更多的信息。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞自噬 腺花素 細(xì)胞死亡 肝細(xì)胞癌
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-10
• 符號說明10-11
• 緒論11-16
• 方法與材料16-27
• 1、細(xì)胞培養(yǎng)與制劑16
• 2、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染與siRNA瞬轉(zhuǎn)敲除16-17
• 3、免疫熒光和共聚焦顯微鏡17-18
• 4、細(xì)胞加藥處理及細(xì)胞收集、蛋白裂解18-19
• 5、免疫印跡技術(shù)19-22
• 6、病毒包裝與細(xì)胞系構(gòu)建22-24
• 7、顯微鏡攝片24
• 8、CCK-8 法檢測IC5024-25
• 9、抗體及試劑、儀器25-27
• 結(jié)果27-37
• 1、腺花素顯著增強(qiáng)肝細(xì)胞癌細(xì)胞的自噬活性27-31
• 2、腺花素誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞自噬活性增強(qiáng)不依賴于Beclin-1 的表達(dá)31-34
• 3、自噬活性喪失的ATG5~(-/-) MEFs對腺花素誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制效應(yīng)更為抵抗34-35
• 4、干預(yù)ATG5表達(dá)的Bel-7402細(xì)胞明顯抵抗腺花素誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制效應(yīng)35-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 致謝46-48
• 碩士期間發(fā)表和待發(fā)表論文目錄48

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本文編號：1116355