目的:糖尿病是一種多病因、復(fù)雜的代謝紊亂性疾病,伴隨極高的致殘率和致死率,與癌癥、心血管疾病并稱為世界三大疾病。西藥治療雖能有效地快速的控制高血糖,但不足之處是對慢性并發(fā)癥的預(yù)防和治療仍缺乏有效措施,除此之外,連續(xù)服用口服降糖藥物會出現(xiàn)藥物失效、高胰島素血癥和胰島素抵抗等問題。而中藥因多成分、多靶點、多種作用機(jī)制等特點,從而產(chǎn)生一個或多個顯著的整體藥理作用,共同產(chǎn)生藥效,符合糖尿病復(fù)雜的病理特點;并且具有療效穩(wěn)定、毒性小、不良反應(yīng)少可長期使用等優(yōu)勢。近年來,在糖尿病的預(yù)防和治療研究中甚為活躍。自古以來,歷代醫(yī)書都有桑葉治療消渴癥的記載,如《本草綱目》有載"桑葉乃手、足陽明之藥......止消渴",日本古書《吃茶養(yǎng)生記》也記載桑葉有改善"飲水病"(即現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的糖尿病)的作用。研究已經(jīng)證實,microRNA(miRNA)通過調(diào)控復(fù)雜的細(xì)胞信號通路網(wǎng)絡(luò)和對細(xì)胞的多方面生物學(xué)行為影響,直接或者間接參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程。鑒于此,本課題從整體、細(xì)胞和基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控水平三個層面,研究桑葉對2型糖尿病胰島β細(xì)胞功能的保護(hù)作用,并進(jìn)一步探索miRNA介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的相關(guān)性,從而闡明桑葉活性部位保護(hù)胰...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)研究
    1.1 2 型糖尿病的發(fā)病機(jī)制
        1.1.1 遺傳因素
        1.1.2 環(huán)境因素
        1.1.3 胰島素抵抗與胰島素分泌缺陷
        1.1.4 其他因素
        1.1.5 總結(jié)
    1.2 β細(xì)胞損傷與2型糖尿病的關(guān)系
        1.2.1 高糖高脂
        1.2.2 氧化應(yīng)激
        1.2.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        1.2.4 總結(jié)
    1.3 與2型糖尿病調(diào)控效應(yīng)相關(guān)的miRNA的研究進(jìn)展
        1.3.1 miRNA對胰島β細(xì)胞功能的影響
        1.3.2 miRNA調(diào)節(jié)胰島素的釋放
        1.3.3 miRNA與胰島素抵抗
        1.3.4 總結(jié)
    1.4 桑葉與2型糖尿病的關(guān)系
        1.4.1 桑葉生物堿
        1.4.2 桑葉總多糖
        1.4.3 桑葉總黃酮
        1.4.4 總結(jié)
第二章 桑葉活性部位的制備工藝研究
    2.1 儀器與材料
        2.1.1 儀器
        2.1.2 材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 桑葉總黃酮的制備工藝研究
        2.2.2 桑葉總生物堿的制備工藝研究
        2.2.3 桑葉總多糖的制備工藝研究
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 桑葉總黃酮制備工藝的確證
        2.3.2 桑葉總生物堿制備工藝的確證
        2.3.3 桑葉總多糖制備工藝的確證
    2.4 討論
第三章 桑葉活性部位對2型糖尿病大鼠胰島β細(xì)胞保護(hù)作用的研究
    3.1 儀器與材料
        3.1.1 儀器
        3.1.2 材料
    3.2 實驗方法
        3.2.1 2型糖尿病動物模型的制備
        3.2.2 實驗設(shè)計和分組
        3.2.3 日常觀察指標(biāo)
        3.2.4 空腹血糖的測定
        3.2.5 大鼠血液樣品的采集
        3.2.6 組織臟器標(biāo)本的取材
        3.2.7 組織HE染色及形態(tài)學(xué)觀察
        3.2.8 胰腺組織形態(tài)學(xué)電鏡觀察
        3.2.9 統(tǒng)計學(xué)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 日常觀察指標(biāo)
        3.3.2 空腹血糖的測定
        3.3.3 空腹胰島素水平的測定
        3.3.4 桑葉活性部位對T2DM大鼠組織病理形態(tài)學(xué)的改變
    3.4 討論
        3.4.1 桑葉活性部位正常對照組設(shè)立的意義
        3.4.2 桑葉活性部位對胰島β細(xì)胞的影響以及對2型糖尿病多靶點的改善作用
第四章 桑葉活性部位對大鼠INS-1細(xì)胞凋亡保護(hù)作用的microRNA機(jī)制研究
    4.1 儀器與材料
        4.1.1 儀器
        4.1.2 材料
    4.2 實驗方法
        4.2.1 INS-1細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)
        4.2.2 INS-1細(xì)胞活性檢測
        4.2.3 流式細(xì)胞儀Annexin V/PI雙染法分析細(xì)胞早期凋亡率
        4.2.4 熒光定量RT-PCR檢測細(xì)胞Bcl-2、Bax、caspase3 mRNA的表達(dá)
        4.2.5 INS-1細(xì)胞microRNA微陣列芯片檢測
        4.2.6 差異表達(dá)的microRNAs生物學(xué)分析
        4.2.7 候選靶基因KEGG生物通路富集分析
        4.2.8 候選靶基因Gene Ontology(GO)基因功能富集分析
        4.2.9 構(gòu)建miRNAs與靶基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
        4.2.10 miRNA基因芯片結(jié)果的PCR驗證
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 桑葉提取物對INS-1細(xì)胞活性的影響
        4.3.2 桑葉活性部位對INS-1細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.3 Bcl-2、Bax、caspase3基因?qū)崟r熒光定量PCR檢測
        4.3.4 INS-1細(xì)胞microRNA提取的質(zhì)量檢測
        4.3.5 桑葉活性部位干預(yù)后INS-1細(xì)胞差異miRNAs表達(dá)譜
        4.3.6 INS-1細(xì)胞基因芯片候選miRNAs的預(yù)測
        4.3.7 miRNA基因芯片結(jié)果在INS-1細(xì)胞的PCR驗證
        4.3.8 miRNA基因芯片結(jié)果在T2DM大鼠胰腺組織上的PCR驗證
        4.3.9 生物信息學(xué)分析
    4.4 討論
結(jié)語與展望
參考文獻(xiàn)
在校期間發(fā)表論文情況
統(tǒng)計學(xué)審核證明
致謝



本文編號：4048845