手術(shù)治療是膽管癌唯一根治的手段,但膽管癌起病隱匿,被查出時(shí)大都已是晚期,癌細(xì)胞已發(fā)生轉(zhuǎn)移,不適合手術(shù)治療,因此尋找敏感性高且毒副作用小的天然抗腫瘤藥物對(duì)于不能手術(shù)切除的膽管癌患者具有重要意義。薯蕷皂苷元(DSG)作為一種用途廣泛的甾體化合物,具有多種藥用功效。近年來(lái),DSG的抗癌作用在多種不同腫瘤中不斷被發(fā)現(xiàn),但對(duì)膽管癌的具體作用及機(jī)制研究寥寥無(wú)幾。本論文以膽管癌細(xì)胞為研究對(duì)象,在體內(nèi)外水平探究DSG在膽管癌中的作用及機(jī)理。細(xì)胞水平:MTS法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DSG抑制膽管癌細(xì)胞增殖,且呈濃度和時(shí)間依賴性,此外,DSG對(duì)膽管癌細(xì)胞克隆形成能力也具有明顯抑制效果。流式檢測(cè)結(jié)果表明DSG使得膽管癌細(xì)胞發(fā)生G2/M期周期阻滯并誘導(dǎo)凋亡。WB結(jié)果顯示CyclinB1的蛋白表達(dá)水平隨藥物濃度升高而降低,p21呈升高趨勢(shì),這提示DSG或通過(guò)對(duì)CyclinB1和P21的調(diào)控造成細(xì)胞周期阻滯,影響細(xì)胞周期進(jìn)程進(jìn)而導(dǎo)致生長(zhǎng)抑制甚至凋亡。我們還發(fā)現(xiàn)經(jīng)藥物處理后Bax/Bcl-2的比例顯著升高,Caspase3和PARP-1明顯發(fā)生片段化;細(xì)胞色素C在線粒體中表達(dá)降低,胞漿中表達(dá)升高;z-VAD-fmk(Caspase...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖４Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色觀察ＤＳＧ對(duì)ＣＣＡ細(xì)胞形態(tài)的影響（２４ｈ，?ｘ２００）??

細(xì)胞核染色未見(jiàn)濃縮致密；而藥物處理組，隨著ＤＳＧ作用濃度的升高，細(xì)胞數(shù)??量逐漸減少，核內(nèi)表現(xiàn)出細(xì)胞核質(zhì)固縮甚至胞核碎裂和濃度致密的顆粒狀強(qiáng)藍(lán)色??熒光現(xiàn)象，部分細(xì)胞形成大小不等的凋亡小體（圖４）。以上現(xiàn)象表明ＤＳＧ使??抑制細(xì)胞增殖與并誘發(fā)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。?．??ＱＢ，Ｈ?Ｗｎ?....

圖６?ＤＳＧ對(duì)ＣＣＡ細(xì)胞集落形成能力的影響??

４．３?ＤＳＧ抑制膽管癌細(xì)胞克隆形成??克隆形成率是反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力的重要指標(biāo)，于是我們探究了??ＤＳＧ對(duì)膽管癌細(xì)胞克隆形成能力的影響。如圖６、７，對(duì)照組細(xì)胞集落形成最多，??克隆形成能力最強(qiáng)，集落分布密集且面積較大；隨著藥物濃度升高最終形成的細(xì)??胞克隆數(shù)越少，最高....

圖７?ＤＳＧ抑制集落形成能力的數(shù)據(jù)分析??

圖７?ＤＳＧ抑制集落形成能力的數(shù)據(jù)分析??Ｆｉｇ．?７?Ｄａｔａ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｌｏｎｅ－ｆｏｒｍｉｎｇ?ａｂｉｌｉｔｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＤＳＧ??

圖１０?ＤＳＧ對(duì)膽管癌ＣＣＡ細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄水平的影響??

４．４．２?ＤＳＧ對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)因子轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的影響??本實(shí)驗(yàn)中，我們使用ｑＲＴ－ＰＣＲ法對(duì)這兩個(gè)重要因子的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了檢測(cè)。??結(jié)果如圖１０所示，兩組細(xì)胞經(jīng)不同濃度ＤＳＧ處理２４ｈ后：對(duì)照組與藥物處理??．?組相比較，兩株細(xì)胞的ｐ２１均表現(xiàn)輕微升高，而ＣｙｃｌｉｎＢｌ表達(dá)....

本文編號(hào)：4044059