目的建立超高效液相色譜-(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)-二極管陣列檢測器-電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-DPPH-PAD-ESI-TOF/MS)快速篩選鑒別天然產(chǎn)物中抗氧化成分的方法,并用于丹參中抗氧化成分的快速發(fā)現(xiàn)。方法采用WatersACQUITY UPLC HSS T3柱(100 mm×3.0 mm,1.8μm),以乙腈-0.2%甲酸水進(jìn)行梯度洗脫,體積流量0.35mL/min實(shí)現(xiàn)丹參提取物的快速分析。柱后流出液與另一路DPPH溶液(0.3mL/min)通過三通閥注入PEEK反應(yīng)線圈(內(nèi)徑0.25 mm,長度10 m)混合反應(yīng)后流入檢測器檢測,檢測波長為254和517 nm,通過517 nm下產(chǎn)生的負(fù)峰所對(duì)應(yīng)的樣品色譜峰來篩選丹參中的抗氧化成分。結(jié)果采用UPLC技術(shù)在低體積流量下實(shí)現(xiàn)樣品的高效分離,避免了高體積流量引起的基線噪音、顯著提高了在線篩選方法的分辨率和靈敏度,降低了溶劑消耗。采用該方法在丹參提取物中共篩選出31個(gè)抗氧化活性成分,采用PAD-ESI-TOF/MS初步鑒定出11種,活性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明,咖啡酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹參素均具有較好抗氧化活性,其中,咖...

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【部分圖文】：

圖1丹參抗氧化成分篩選流程圖

本研究通過色譜條件和在線篩選條件的系統(tǒng)優(yōu)化，建立了基于UPLC-DPPH技術(shù)的抗氧化活性成分快速篩選技術(shù)體系，并通過高分辨TOF/MS技術(shù)對(duì)活性成分進(jìn)行初步鑒別，為復(fù)雜基質(zhì)天然產(chǎn)物中抗氧化成分的快速分析研究提供技術(shù)支持，具體流程圖見圖1。1儀器與材料

圖2丹參提取物的UPLC圖譜(254nm)

本研究所用抗氧化成分在線篩選條件是在前期建立的在線抗氧化篩選模型基礎(chǔ)上進(jìn)行了適當(dāng)修改[9]。針對(duì)不同的篩選樣本，其中活性成分類型、含量以及活性強(qiáng)弱具有較大差異，其相應(yīng)的色譜分離溶劑體系和體積流量等會(huì)對(duì)篩選方法靈敏度、基線穩(wěn)定性造成較大影響，因此，有必要對(duì)DPPH在線篩選條件進(jìn)行系....

圖3丹參抗氧化成分UPLC-DPPH篩選

按照最優(yōu)化的篩選條件對(duì)丹參提取物進(jìn)行在線抗氧化成分篩選，結(jié)果見圖3。由圖3可知，該提取物中共篩選出31個(gè)具有抗氧化活性的化合物�；钚暂^明顯的化合物多集中在前50min，根據(jù)反相色譜柱洗脫出峰極性規(guī)律特征可知，這些化合物極性相對(duì)較強(qiáng)，結(jié)合文獻(xiàn)資料初步推斷為為酚酸類成分。3.3質(zhì)....

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