骨肉瘤是兒童及青少年最常發(fā)生的一種原發(fā)性非血液系統(tǒng)惡性腫瘤,早期以外科截肢為主要治療手段,但手術(shù)創(chuàng)傷大,致殘率高,遠期生存率低,特別是伴有轉(zhuǎn)移的患者預(yù)后很差,究其原因主要是目前骨肉瘤的發(fā)病及轉(zhuǎn)移機制尚不明確,缺乏特異有效的治療方法,因此闡明骨肉瘤的發(fā)病機制,并尋找有效的靶向治療措施對于提高患者的生存率具有重要意義。我們采用前期研究中得到的一種傳統(tǒng)中藥藤黃的提取物--新藤黃酸(NGA)在骨肉瘤細胞中進行了一系列抗腫瘤效應(yīng)的探索,并通過CETSA實驗確認其作用靶標(biāo),最后通過一系列實驗探討了其靶標(biāo)的作用機制。我們發(fā)現(xiàn)NGA可靶向抑制泛素特異性蛋白酶USP9x的活性,加速干細胞相關(guān)因子SOX2的降解,從而顯著抑制骨肉瘤細胞增殖,誘導(dǎo)其凋亡,降低骨肉瘤細胞的克隆形成能力,為骨肉瘤的靶向治療和抗癌新藥研發(fā)提供了新思路。同時本研究還在骨肉瘤中首次證明USP9x可通過去泛素化作用調(diào)控SOX2的降解,進而影響腫瘤的生長特性。通過上述研究我們證實了NGA在骨肉瘤靶向治療中的潛在臨床應(yīng)用價值,為相關(guān)抗癌新藥的研發(fā)提供了新思路;同時也證明了USP9x可靶向SOX2參與調(diào)控骨肉瘤的生長,為闡明腫瘤的發(fā)生發(fā)展機制...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
全文縮略語中英文對照
第一部分 新藤黃酸靶向USP9x抑制骨肉瘤生長的機制研究
    第一章 研究背景和問題的提出
        1.1 骨肉瘤的研究進展
        1.2 USP9X與腫瘤的發(fā)生發(fā)展
        1.3 本文主要研究內(nèi)容概述
    第二章 新藤黃酸NGA對骨肉瘤細胞的生物學(xué)效應(yīng)研究
        2.1 材料與方法
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 實驗方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 NGA抑制骨肉瘤細胞增殖
            2.2.2 NGA誘導(dǎo)骨肉瘤細胞凋亡
            2.2.3 NGA抑制骨肉瘤細胞克隆形成,對細胞周期無明顯影響
        2.3 小結(jié)與討論
    第三章 新藤黃酸NGA對泛素特異性蛋白酶USP9x的影響
        3.1 材料與方法
            3.1.1 主要試劑
            3.1.2 主要儀器
            3.1.3 實驗方法
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 NGA促進骨肉瘤細胞內(nèi)泛素化蛋白的累積
            3.2.2 NGA對蛋白酶體無明顯抑制作用
            3.2.3 NGA可改變USP9x的熱穩(wěn)定性,但不改變其蛋白水平
        3.3 小結(jié)與討論
    第四章 泛素特異性蛋白酶USP9x在骨肉瘤中的作用
        4.1 材料與方法
            4.1.1 主要試劑
            4.1.2 主要儀器
            4.1.3 實驗方法
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 敲低USP9x可誘導(dǎo)骨肉瘤細胞發(fā)生周期阻滯
            4.2.2 敲低USP9x可抑制骨肉瘤細胞增殖,克隆形成與遷移能力
        4.3 小結(jié)與討論
    第五章 USP9x通過去泛素化作用穩(wěn)定SOX2
        5.1 材料和方法
            5.1.1 主要試劑
            5.1.2 主要儀器
            5.1.3 實驗方法
        5.2 結(jié)果
            5.2.1 USP9x在骨肉瘤患者中的表達與SOX2存在一致性
            5.2.3 USP9x與 SOX2存在相互作用
            5.2.4 USP9x使 SOX2發(fā)生去泛素化
            5.2.5 過表達SOX2可逆轉(zhuǎn)USP9x敲除引起的生物學(xué)效應(yīng)
        5.3 小結(jié)與討論
    第六章 NGA促進SOX2的泛素化降解
        6.1 材料與方法
            6.1.1 主要試劑
            6.1.2 主要儀器
            6.1.3 實驗方法
        6.2 結(jié)果
            6.2.1 NGA可促進SOX2的降解
            6.2.2 NGA可增強SOX2的泛素化
        6.3 小結(jié)與討論
    第七章 討論與全文小結(jié)
第二部分 泛素特異性蛋白酶USP14 參與調(diào)控口腔鱗癌細胞的增殖與凋亡
    第一章 研究背景
    第二章 研究方法與結(jié)果
        2.1 材料與方法
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 實驗方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 USP14在OSCC中的表達
            2.2.2 抑制USP14酶活性對OSCC細胞增殖和凋亡的影響
            2.2.3 敲低USP14對OSCC細胞增殖和遷移的影響
    第三章 討論與全文小結(jié)
參考文獻
致謝
附錄1 綜述
    參考文獻
附錄2 學(xué)術(shù)論文和科研成果目錄
附錄3 研究生期間所獲獎勵目錄



本文編號：3821718