糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一,是導(dǎo)致終末期腎病(end-stage renal disease,ESRD)的主要原因。其主要病理改變?yōu)槟I小球系膜細胞(Human mesangial cels,HMCs)的過度增殖、細胞外基質(zhì)(extracellular martrixc,ECM)積聚和基底膜增厚。在高糖環(huán)境下,HMCs中細胞外基質(zhì)分泌增多而積聚于系膜區(qū),使腎小球發(fā)生一系列病理變化,最終導(dǎo)致腎小球硬化。胡蘆巴堿(Trigonelline,TRL)具有降血糖、降血脂、降低膽固醇和抗氧化等功效,但其對高糖狀態(tài)下的HMCs的作用機制尚不明確。目的:探討胡蘆巴堿對高糖誘導(dǎo)下HMCs增殖、凋亡及細胞外基質(zhì)表達的影響及Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控。方法:1.采用ELISA法和免疫細胞化學(xué)法檢測FN、Col IV在HMCs中分泌及表達情況。2.采用MTT法檢測HMCs增殖情況;采用流式細胞術(shù)檢測細胞周期。3.采用RT-PCR和Western blot檢測Wnt/β-catenin通路相關(guān)因子Wnt5a、β-catenin、TCF4、Cy...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 Wnt信號通路
        1.1.1 Wnt/β-catenin信號通路的組成
        1.1.2 Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控作用
        1.1.3 Wnt/β-catenin信號通路與疾病的關(guān)系
        1.1.4 Wnt/β-catenin信號通路與細胞周期
        1.1.5 Wnt/β-catenin信號通路與細胞凋亡
    1.2 胡蘆巴中有效成分防治糖尿病研究進展
        1.2.1 胡蘆巴概述
        1.2.2 胡蘆巴抗糖尿病的有效成分及其作用機制
    1.3 HMCs與DN
        1.3.1 HMCs在DN發(fā)生、發(fā)展中的作用
        1.3.2 HMCs高糖條件體外模擬DN
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 藥品配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 HMCs的復(fù)蘇、培養(yǎng)及傳代
        2.2.2 MTT法檢測胡蘆巴堿對高糖下的HMCs增殖的影響
        2.2.3 ELISA檢測胡蘆巴堿對HMCs中FN、Col IV分泌情況的影響
        2.2.4 免疫細胞化學(xué)方法檢測HMCs中FN、Col IV表達情況
        2.2.5 瞬時轉(zhuǎn)染
        2.2.6 RT-PCR法檢測Wnt/β -catenin通路相關(guān)基因表達水平
        2.2.7 Western Blot法檢測Wnt/β -catenin通路相關(guān)蛋白表達水平
        2.2.8 流式細胞儀檢測胡蘆巴堿對高糖下HMCs細胞周期的影響
        2.2.9 流式細胞儀檢測胡蘆巴堿對高糖下HMCs凋亡的影響
        2.2.10 TUNEL法檢測胡蘆巴堿對高糖下HMCs凋亡的影響
        2.2.11 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 MTT法檢測胡蘆巴堿對高糖下HMCs增殖的作用
    3.2 ELISA檢測胡蘆巴堿對高糖下HMCs FN、Col IV分泌水平的影響
    3.3 免疫細胞化學(xué)法檢測胡蘆巴堿對高糖下HMCs FN、Col IV分泌水平的影響
    3.4 胡蘆巴堿對高糖下HMCs Wnt/β-catenin通路相關(guān)因子m RMA表達的影響
    3.5 胡蘆巴堿對高糖下HMCs Wnt/β-catenin通路相關(guān)因子蛋白表達的影響
    3.6 胡蘆巴堿對高糖下HMCs細胞周期的影響
    3.7 胡蘆巴堿對高糖引起的HMCs凋亡的抑制作用
    3.8 TUNEL檢測胡蘆巴堿對高糖下HMCs凋亡結(jié)果
第4章 討論
    4.1 胡蘆巴堿對HMCs增殖的影響
    4.2 胡蘆巴堿對HMCs分泌ECM能力的影響
    4.3 胡蘆巴堿高糖條件下HMCs中Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控
    4.4 胡蘆巴堿對HMCs凋亡的影響
第5章 結(jié)論與創(chuàng)新點
參考文獻
作者簡介
致謝



本文編號：3768672