目的:一方面,利用網絡藥理學的手段,對二精丸防治AD的物質基礎與作用機制進行虛擬篩選,為后期實驗奠定基礎;另一方面,利用行為學、形態(tài)學、蛋白質組學和細胞實驗驗證的研究方法,研究二精丸對去卵巢聯合D-半乳糖與Aβ_1-40注射所致AD大鼠學習記憶的影響及其物質基礎與作用機制,兩者相互印證,共同指明二精丸防治AD的物質基礎與作用機制。方法:1基于網絡藥理學二精丸防治AD物質基礎與作用機制研究1.1二精丸化合物的獲取和篩選通過TCMSP數據庫、臺灣中醫(yī)藥資料庫、中國科學院化學數據庫三個數據庫、相關文獻調研和實驗室獲取,對二精丸的化學成分進行搜集。為了便于后期分析,將枸杞子和黃精中的化合物統一命名,并利用DS軟件中的ADMET Descriptors模塊,對所收集到的成分進行類藥性篩選。1.2二精丸活性化合物的靶點預測利用PubChem數據庫,將所有的化合物都轉化為標準的Canonical SMILES格式,將SMILES格式文件導入Swiss Target Prediction平臺,設置屬性為“homo sapiens”,預測活性化合物的潛在靶點并根據文獻報道補充未預測到...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
abstract
英文縮略表
引言
第一部分 基于網絡藥理學二精丸防治AD物質基礎與作用機制研究
    1 材料
    2 方法
        2.1 二精丸化合物的獲取和篩選
        2.2 二精丸活性化合物的靶點預測
        2.3 二精丸防治AD靶點的搜集
        2.4 通路的富集分析
        2.5 構建成分-靶蛋白-信號通路網絡
        2.6 分子對接驗證
    3 結果
        3.1 二精丸活性成分的篩選
        3.2 靶點預測
        3.3 基因功能和通路富集分析
        3.4 二精丸防治AD“活性成分-靶點-通路”網絡構建
        3.5 分子對接
    4 討論
    5 本章小結
第二部分 二精丸對去卵巢聯合D-半乳糖與Aβ1-40 注射所致AD大鼠的藥效學評價
    1 材料
        1.1 實驗藥物
        1.2 實驗動物
        1.3 試劑
        1.4 儀器
    2 試驗方法
        2.1 黃精、枸杞含量測定
        2.2 藥物制備
        2.3 動物造模、分組及給藥
        2.4二精丸對AD大鼠學習記憶的影響——Morris水迷宮、新物體實驗
            2.4.1 Morris水迷宮試驗
            2.4.2 新物體識別實驗
        2.5 二精丸對AD大鼠海馬形態(tài)學影響
        2.6 二精丸對AD大鼠海馬區(qū)Aβ1-40及p-tau404蛋白表達水平的影響
            2.6.1 免疫組化法測定AD大鼠海馬Aβ表達水平
            2.6.2 免疫組化法測定AD大鼠海馬p-tau表達水平
        2.7 二精丸對AD大鼠雌激素水平、海馬區(qū)ERβ表達的影響
            2.7.1 EKISA Kit測定AD大鼠海馬雌激素表達水平
            2.7.2 免疫組化法測定AD大鼠海馬雌激素受體表達水平
        2.8 二精丸對AD大鼠腦內DA水平、海馬區(qū)D1 受體和TH表達的影響
            2.8.1 EKISA Kit測定AD大鼠海馬DA表達水平
            2.8.2 免疫組化法測定AD大鼠海馬D1 受體和TH表達水平
        2.9 基于海馬蛋白質組學二精丸防治AD的機制研究
            2.9.1 海馬組織全蛋白的提取
            2.9.2 海馬蛋白濃度的測定
            2.9.3 蛋白質的提取、還原、烷基化、酶解及檢測
                2.9.3.1 Nanol液相色譜條件
                2.9.3.2 LTQ Orbitrap Elite質譜條件
            2.9.4 數據分析方法
        2.10 統計學分析
    3 結果
        3.1 黃精、枸杞含量測定
            3.1.1 黃精含量測定結果
                3.1.1.1 黃精水分測定結果
                3.1.1.2 黃精葡萄糖測定結果
            3.1.2 枸杞含量測定結果
                3.1.2.1 枸杞水分測定結果
                3.1.2.2 枸杞葡萄糖測定結果
                3.1.2.3 枸杞甜菜堿測定結果
        3.2 陰道上皮脫落細胞涂片檢測結果
        3.3二精丸對AD大鼠學習記憶的影響——Morris水迷宮、新物體實驗
            3.3.1 Morris水迷宮試驗結果
            3.3.2 新物體識別實驗結果
        3.4 二精丸對AD大鼠海馬神經元的影響
            3.4.1 HE染色結果
            3.4.2 尼氏染色結果
        3.5 二精丸對AD大鼠海馬區(qū)Aβ1-40及p-tau404蛋白表達水平的影響
            3.5.1 海馬Aβ表達水平
            3.5.2 大鼠海馬p-tau404表達水平
        3.6 二精丸對AD大鼠雌激素水平、海馬區(qū)ERβ表達的影響
            3.6.1 大鼠血清雌激素含量
            3.6.2 大鼠海馬雌激素受體表達水平
        3.7 二精丸對AD大鼠腦內DA水平、海馬區(qū)D1 受體和TH表達的影響
            3.7.1 EKISAKit測定去卵巢聯合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海馬DA水平
            3.7.2 免疫組化法測定去卵巢聯合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海馬D1受體表達水平
            3.7.3 免疫組化法測定去卵巢聯合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海馬TH表達水平
        3.8 基于海馬蛋白質組學二精丸防治AD機制研究的結果
            3.8.1 海馬蛋白總離子流圖
            3.8.2 二精丸對AD大鼠海馬蛋白組學影響
            3.8.3 差異蛋白GO分析結果
            3.8.4 String網絡分析
            3.8.5 KEGG數據庫信號通路富集分析結果
    4.討論
    5.本章小結
第三部分 二精丸防治AD的物質基礎研究
    1 材料
        1.1 試驗細胞
        1.2 試驗藥物
        1.3 試驗試劑
        1.4 儀器
        1.5 藥物的配制
    2 實驗方法
        2.1 二精丸單體化合物對PC12 細胞存活率的影響
        2.2 二精丸單體化合物對Aβ25-35 所致PC12 細胞AD模型存活率的影響
        2.3 二精丸單體化合物對Aβ25-35 所致PC12 細胞內Ca2+的影響
    3 實驗結果
        3.1 二精丸單體化合物對PC12 細胞存活率的影響
        3.2 二精丸單體化合物對Aβ25³5 所致PC12 細胞AD模型存活率的影響
        3.3 二精丸單體化合物對Aβ25-35 所致PC12 細胞內Ca2+的影響
    4 討論
    5 本章小結
結論
參考文獻
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本文編號：3743676