肺癌是世界上最常見的癌癥,為一種異質(zhì)性、復(fù)雜性和挑戰(zhàn)性的疾病,而且它的新發(fā)病例逐年上升。天然產(chǎn)物作為新藥研發(fā)的重要來源之一,這就促使我們?cè)谔烊划a(chǎn)物中尋找效果更好或有新靶點(diǎn)的抗腫瘤化合物。薯蕷皂苷元是從薯蕷屬植物的根莖中提取出來的一種植物甾體皂苷,是合成甾體類激素的重要原料。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明,薯蕷皂苷元具有抗腫瘤、抗炎、降血脂和免疫調(diào)節(jié)等功能,并且毒副作用較低,應(yīng)用廣泛。本課題組致力于薯蕷皂苷元的結(jié)構(gòu)修飾和活性篩選,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾的薯蕷皂苷元衍生物具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性。在本論文中,我們研究了化合物7在人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的方式和機(jī)制。MTT法對(duì)一系列薯蕷皂苷元衍生物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選,篩選出最有潛力的化合物7進(jìn)行后續(xù)機(jī)制研究。觀察藥物對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響時(shí),發(fā)現(xiàn)化合物可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生明顯的空泡,空泡不斷增多,相互融合,最終細(xì)胞膜破裂,細(xì)胞死亡。用PI染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn),化合物7導(dǎo)致A549細(xì)胞阻滯在G0/G1期。Annexin V/PI雙染并用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞的凋亡率,Western blot測(cè)定PARP蛋白,廣譜的凋亡抑制劑（Z-VAD-FMK）測(cè)定細(xì)胞死亡... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略語詞匯表
第一章 前言
    1.1 巨泡性死亡
    1.2 旁凋亡
    1.3 自噬
    1.4 脹亡
    1.5 四種出泡性死亡機(jī)制的異同
第二章 薯蕷皂苷元衍生物誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞出泡性死亡的機(jī)制研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 化合物來源
        2.2.2 細(xì)胞株來源及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.3 試劑
        2.2.4 主要儀器
        2.2.5 常用試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和凍存
        2.3.2 MTT法檢測(cè)化合物的細(xì)胞毒性
        2.3.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期
        2.3.4 Western blotting
        2.3.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.3.6 免疫熒光
        2.3.7 體內(nèi)移植瘤抑制實(shí)驗(yàn)
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 抗腫瘤活性篩選
        2.4.2 化合物7誘導(dǎo)多株腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生空泡化現(xiàn)象
        2.4.3 化合物7誘導(dǎo)非凋亡性細(xì)胞死亡
        2.4.4 化合物7誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯
        2.4.5 化合物7誘導(dǎo)非旁凋亡性細(xì)胞死亡
        2.4.6 化合物7誘導(dǎo)非自噬性細(xì)胞死亡
        2.4.7 化合物7誘導(dǎo)巨泡性死亡
        2.4.8 化合物7體內(nèi)抗腫瘤活性
    2.5 討論
第三章 片葉苔素D衍生物的抗腫瘤活性篩選和機(jī)制研究
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 化合物來源
        3.2.2 細(xì)胞株來源
        3.2.3 試劑
        3.2.4 儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 MTT法檢測(cè)化合物的細(xì)胞毒性
        3.3.2 DAPI染色
        3.3.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        3.3.4 溶酶體熒光探針染色和吖啶橙染色
        3.3.5 xCELLigence系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 抗腫瘤活性篩選
        3.4.2 片葉苔素D衍生物誘導(dǎo)溶酶體膜滲透(LMP)
        3.4.3 片葉苔素D衍生物誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡和壞死
    3.5 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表



本文編號(hào)：3633171