發(fā)布時間：2021-09-24 02:58

　　以SIRT1和線粒體為切入點,采用分子生物學技術(shù)以及多種線粒體分析技術(shù),深入探討SIRT1和線粒體在衰老細胞中的作用,揭示歸芪多糖延緩細胞衰老的分子作用機制。結(jié)果表明,AAP顯著降低細胞的衰老程度并提高細胞活力,而Ex527阻斷AAP的作用。同時,發(fā)現(xiàn)AAP增強細胞內(nèi)SIRT1和CyclinD1的表達,降低p53的表達水平,在Ex527組中未觀察到類似的逆轉(zhuǎn)作用。線粒體分析結(jié)果顯示,AAP可顯著降低細胞內(nèi)的活性氧水平,降低線粒體膜電位,減輕線粒體腫脹程度和增加線粒體內(nèi)ATP含量,而Ex527的預處理消除這些作用�；谏鲜鼋Y(jié)果,推測AAP可能通過信號通路p53/p16和CyclinD/CDK4來改善線粒體功能,從而達到延緩衰老的作用,且這些作用與SIRT1密切相關(guān)。 

【文章來源】：西北農(nóng)業(yè)學報. 2020,29(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

細胞形態(tài)圖(×200)

在正常的人類細胞中, p53或 p21基因的失活可以延長細胞的復制壽命[17]。此外,研究表明,ROS/p53/p21信號通路在衰老中起著至關(guān)重要的作用[18]。研究[19]還顯示,人參,三七和川芎提取物可以通過改變p16-cyclin D/CDK-Rb通路因子的表達來延遲大鼠血管平滑肌細胞的衰老。蛋白質(zhì)檢測結(jié)果如圖4和圖5所示,與正常對照組相比,H2O2組中SIRT1和CyclinD1蛋白的表達水平明顯降低,p53蛋白的表達水平顯著升高,AAP的干預顯著提高SIRT1和CyclinD1蛋白的表達水平,同時下調(diào)p53蛋白的表達水平,Ex527逆轉(zhuǎn)以上相應作用,白藜蘆醇對以上蛋白產(chǎn)生同樣的調(diào)控作用,且與AAP相比無顯著性差異。此結(jié)果表明,AAP和白藜蘆醇通過影響p53、CyclinD1及其下游信號分子的表達達到其抗衰老作用,而這些通路很有可能是經(jīng)過SIRT1直接或間接調(diào)控的。圖4 蛋白表達結(jié)果

ROS水平檢測是基于熒光染料DCFH - DA(2,7-二氯二氫熒光素二乙酸酯)的熒光強度變化來定量檢測細胞內(nèi)活性氧種類的最常用方法。DCFH - DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜。進入細胞后,它可以被細胞中的酯酶水解生成DCFH,而DCFH不會穿透細胞膜,因此探針很容易在細胞中積聚。細胞中的活性氧可以氧化非熒光DCFH,產(chǎn)生熒光DCF。熒光強度與活性氧水平成正比。結(jié)果如圖6和圖7所示,AAP明顯降低H2O2所誘導的細胞內(nèi)活性氧的水平,而在Ex527預處理的細胞中未發(fā)現(xiàn)這樣的趨勢,同樣的趨勢也出現(xiàn)在白藜蘆醇組中,這表明AAP和白藜蘆醇可通過降低細胞內(nèi)活性氧的水平來延緩細胞衰老,且可能是由SIRT1介導的。圖6 活性氧測定結(jié)果

【參考文獻】：
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