土槿皮乙酸誘導人肝癌細胞周期延遲及凋亡的機制研究
發(fā)布時間：2021-09-04 23:37
目的:原發(fā)性肝癌是一種惡性腫瘤,在我國比較常見,在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中原發(fā)性肝癌的死亡率居于第3位,每年我國死于肝癌的患者大約11萬人,中國原發(fā)性肝癌的死亡人數占世界范圍內的45%。手術切除是治療肝癌的主要方式,目前沒有針對性的治療藥物。中藥單體化合物土槿皮乙酸（Pseudolaric Acid B,PAB）是從土槿皮中分離獲得的一種新型二萜酸。有研究證明PAB具有抗微管、抗血管生成、抗腫瘤等藥理作用。本實驗對其抗肝癌作用及作用機制進行了分析。方法:MTT法確定土槿皮乙酸是否具有抑制腫瘤細胞增殖的能力;熒光染色法檢測土槿皮乙酸處理后SMMC7721細胞微管聚集情況;土槿皮乙酸處理后的肝癌細胞SMMC7721轉移的情況用劃痕法來確定;土槿皮乙酸誘導的細胞死亡通過細胞形態(tài)學觀察細胞形態(tài)學變化確定;DNA瓊脂糖凝膠電泳確定土槿皮乙酸是否誘導SMMC7721細胞凋亡的發(fā)生;流式細胞儀檢測土槿皮乙酸對細胞周期的影響;土槿皮乙酸對基因CyclinB1和CDK1的轉錄的影響用Real-time PCR檢測;細胞凋亡和周期相關蛋白的表達應用Western blot方法檢測,通過如上方法確定土槿皮乙酸誘導...
【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學吉林省
【文章頁數】：72 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
凋亡細胞的DNA變化
圖 3 Caspase 激活通路圖當下游的 Caspase 在活化后會執(zhí)行相應的功能（Table 1-1）。研究發(fā)現 Caspase 的底可以分為四類：第一類，被激活的底物，例如 Caspase 本身，還有被 Caspase 激活的NA 酶（CAD）。第二類，被失活的底物，例如 DNA 蛋白激酶（DNA-PK），還有視網神經膠質瘤的抑制蛋白。第三類，一些結構蛋白，結構蛋白的聚集或解聚被 Caspase 蛋的切割影響，例如，A-型核層蛋白和 B-型核層蛋白（lamins）。第四類，明確了 Caspase白對底物的切斷作用，但具體后果不清楚。Table. 1-1 Human Caspase SuperfamilyProteases Alternative Names Sequence SubstratesCaspase-1 ICE YVAD pro-IL1 , pro-Caspase 3 and4Caspase-2 ICH-1 DXXD PARPCaspase-3 CPP32, Yama,DEXD PARP, DNA-PK, SRE/BP,
圖 4 細胞周期的概述Overview of the eukaryotic cell cycle在 G1期內，為了合成 DNA，細胞會準備 DNA 合成所需要的蛋白質及 mRNA 等物質，進而為 DNA 的復制做好準備。研究發(fā)現，細胞周期的第一個細胞周期檢驗點位于G1/S 期交界處，當生長因子刺激信號持續(xù)存在的時候，細胞可以躍過這個檢驗，順利進入到 S 期，但如果檢查到異常情況，細胞周期將會停止，不會進行 DNA 復制，所以 G1/期檢查點保證了 S 期進入的準確性。在 S 期內，細胞會進行 DNA 的合成和基因組的復制，這個過程極易引起突變的進入，所以 S 期較短。但是當細胞進入到 S 期后，則無論是否發(fā)生 DNA 損傷且還是是否缺少生長因子刺激信號，DNA 的復制都會完成，所以 期的不恰當進入導致了基因突變、缺失、插入的存在。DNA 復制后，細胞周期會從 期進入 G2期，在 G2 期準備了有絲分裂和細胞分裂的物質和原料。在進行有絲分裂前細胞會檢查 DNA 復制是否正確，是有累積了過多的 DNA 損傷，這些工作在細胞周期的 G期完成，如有 DNA 損傷，則進行修復，如果修復無法完成則細胞死亡。然后，如
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cell cycle regulation and anticancer drug discovery[J]. Jingwen Bai,Yaochen Li,Guojun Zhang. Cancer Biology & Medicine. 2017(04)
[2]中藥治療肝癌機制的研究進展[J]. 賀珊,廖長秀. 中成藥. 2017(01)
[3]羥基紅花黃色素A抑制異常增殖血管內皮細胞的機制研究[J]. 王熙熙,王景景,王旭,范盎然,于雪,胡京紅,解華,徐瑩瑩,劉麗,臧寶霞,張前. 北京中醫(yī)藥大學學報. 2016(08)
[4]蛇床子素抑制膀胱癌細胞生長和侵襲的機制[J]. 劉軍,徐冉,趙曉昆. 中南大學學報(醫(yī)學版). 2016(04)
[5]細胞周期與腫瘤轉化醫(yī)學[J]. 詹啟敏,陳杰. 中國腫瘤臨床. 2014(01)
[6]復方中藥對小鼠肺癌細胞凋亡的影響[J]. 梁朝暉,潘智然,李娟. 世界中西醫(yī)結合雜志. 2008(11)
[7]西黃丸對肝癌細胞SMMC7721分泌的血管內皮生長因子及基質金屬蛋白酶2、9的影響[J]. 金沈銳,張新勝,祝彼得,秦旭華. 中成藥. 2008(07)
[8]中藥“松友飲”對高轉移人肝癌侵襲性及小鼠免疫功能的影響[J]. 黃修燕,黃自麗,晁愚,王魯,周儉,葉勝龍,湯釗猷. 腫瘤. 2008(06)
[9]清開靈注射液對HepG2細胞u-PAR表達影響的實驗研究[J]. 王文花,單澤松,胡海燕,張曉艷. 中華中醫(yī)藥學刊. 2008(06)
[10]康萊特注射液抗惡性腫瘤肝轉移療效及機制的實驗研究[J]. 黃挺,陳震,楊雪飛,李勇,張志娣,黃伶,張建剛,張曉麗. 中國現代應用藥學. 2008(01)
本文編號：3384223
【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學吉林省
【文章頁數】：72 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
凋亡細胞的DNA變化
圖 3 Caspase 激活通路圖當下游的 Caspase 在活化后會執(zhí)行相應的功能（Table 1-1）。研究發(fā)現 Caspase 的底可以分為四類：第一類，被激活的底物，例如 Caspase 本身，還有被 Caspase 激活的NA 酶（CAD）。第二類，被失活的底物，例如 DNA 蛋白激酶（DNA-PK），還有視網神經膠質瘤的抑制蛋白。第三類，一些結構蛋白，結構蛋白的聚集或解聚被 Caspase 蛋的切割影響，例如，A-型核層蛋白和 B-型核層蛋白（lamins）。第四類，明確了 Caspase白對底物的切斷作用，但具體后果不清楚。Table. 1-1 Human Caspase SuperfamilyProteases Alternative Names Sequence SubstratesCaspase-1 ICE YVAD pro-IL1 , pro-Caspase 3 and4Caspase-2 ICH-1 DXXD PARPCaspase-3 CPP32, Yama,DEXD PARP, DNA-PK, SRE/BP,
圖 4 細胞周期的概述Overview of the eukaryotic cell cycle在 G1期內，為了合成 DNA，細胞會準備 DNA 合成所需要的蛋白質及 mRNA 等物質，進而為 DNA 的復制做好準備。研究發(fā)現，細胞周期的第一個細胞周期檢驗點位于G1/S 期交界處，當生長因子刺激信號持續(xù)存在的時候，細胞可以躍過這個檢驗，順利進入到 S 期，但如果檢查到異常情況，細胞周期將會停止，不會進行 DNA 復制，所以 G1/期檢查點保證了 S 期進入的準確性。在 S 期內，細胞會進行 DNA 的合成和基因組的復制，這個過程極易引起突變的進入，所以 S 期較短。但是當細胞進入到 S 期后，則無論是否發(fā)生 DNA 損傷且還是是否缺少生長因子刺激信號，DNA 的復制都會完成，所以 期的不恰當進入導致了基因突變、缺失、插入的存在。DNA 復制后，細胞周期會從 期進入 G2期，在 G2 期準備了有絲分裂和細胞分裂的物質和原料。在進行有絲分裂前細胞會檢查 DNA 復制是否正確，是有累積了過多的 DNA 損傷，這些工作在細胞周期的 G期完成，如有 DNA 損傷，則進行修復，如果修復無法完成則細胞死亡。然后，如
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cell cycle regulation and anticancer drug discovery[J]. Jingwen Bai,Yaochen Li,Guojun Zhang. Cancer Biology & Medicine. 2017(04)
[2]中藥治療肝癌機制的研究進展[J]. 賀珊,廖長秀. 中成藥. 2017(01)
[3]羥基紅花黃色素A抑制異常增殖血管內皮細胞的機制研究[J]. 王熙熙,王景景,王旭,范盎然,于雪,胡京紅,解華,徐瑩瑩,劉麗,臧寶霞,張前. 北京中醫(yī)藥大學學報. 2016(08)
[4]蛇床子素抑制膀胱癌細胞生長和侵襲的機制[J]. 劉軍,徐冉,趙曉昆. 中南大學學報(醫(yī)學版). 2016(04)
[5]細胞周期與腫瘤轉化醫(yī)學[J]. 詹啟敏,陳杰. 中國腫瘤臨床. 2014(01)
[6]復方中藥對小鼠肺癌細胞凋亡的影響[J]. 梁朝暉,潘智然,李娟. 世界中西醫(yī)結合雜志. 2008(11)
[7]西黃丸對肝癌細胞SMMC7721分泌的血管內皮生長因子及基質金屬蛋白酶2、9的影響[J]. 金沈銳,張新勝,祝彼得,秦旭華. 中成藥. 2008(07)
[8]中藥“松友飲”對高轉移人肝癌侵襲性及小鼠免疫功能的影響[J]. 黃修燕,黃自麗,晁愚,王魯,周儉,葉勝龍,湯釗猷. 腫瘤. 2008(06)
[9]清開靈注射液對HepG2細胞u-PAR表達影響的實驗研究[J]. 王文花,單澤松,胡海燕,張曉艷. 中華中醫(yī)藥學刊. 2008(06)
[10]康萊特注射液抗惡性腫瘤肝轉移療效及機制的實驗研究[J]. 黃挺,陳震,楊雪飛,李勇,張志娣,黃伶,張建剛,張曉麗. 中國現代應用藥學. 2008(01)
本文編號：3384223
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