目的:探討Sal是否能通過DJ-1/Akt抗氧化通路在體內(nèi)外發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)一:建立MPP⁺誘導(dǎo)的PD-MN9D細(xì)胞損傷模型,篩選出MPP⁺處理MN9D細(xì)胞凋亡的最佳作用濃度和Sal對(duì)MPP⁺誘導(dǎo)的PD細(xì)胞模型的最佳保護(hù)濃度。實(shí)驗(yàn)二、實(shí)驗(yàn)三:分別用siAkt和siDJ-1轉(zhuǎn)染PD-MN9D細(xì)胞,探討Akt和DJ-1在Sal對(duì)細(xì)胞模型的保護(hù)作用中的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)四:建立MPTP誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠PD模型,探討Sal對(duì)小鼠模型行為學(xué)和神經(jīng)組織學(xué)的影響。方法:實(shí)驗(yàn)一:CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力,分別篩選出MPP⁺和Sal的最佳作用濃度;設(shè)立（1）空白對(duì)照組,（2）Sal組,（3）MPP⁺組,（4）Sal+MPP⁺組;Hoechst染色、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同處理組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化和凋亡水平;蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同處理組細(xì)胞內(nèi)DJ-1,Akt,p-Akt,GSK3β,p-GSK3β,cleaved-caspase3的蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)二、實(shí)驗(yàn)三:分別用siA... 

【文章來源】：陜西中醫(yī)藥大學(xué)陜西省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Sal預(yù)處理保護(hù)MN9D細(xì)胞，減低MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞活力降低A：Sal化學(xué)結(jié)構(gòu)式

圖 1.1 Sal 預(yù)處理保護(hù) MN9D 細(xì)胞，減低 MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞活力降低Sal 化學(xué)結(jié)構(gòu)式。B:0-500μM MPP+處理細(xì)胞 24h，細(xì)胞活力隨 MPP+濃度升高降低。C：Sal 預(yù)處理可減輕 MPP+對(duì) MN9D細(xì)胞活力的損傷。使用 CCK-8法檢細(xì)胞活力。**代表與對(duì)照組對(duì)比，P＜0.01；##代表與 MPP+組對(duì)比，P＜01。MPP+常用于制作 PD 細(xì)胞模型。本實(shí)驗(yàn)采用 MPP+誘導(dǎo) MN9D 細(xì)胞制作 P胞模型。通過 CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果如圖 B，不同濃度 MPP+（0、0 、 200 、 300 、 400 、 500μM ）處理細(xì)胞 24h ，細(xì)胞活力以劑量依賴式降，300μM MPP+作為處理 MN9D 細(xì)胞 24h 的最佳濃度，用于后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。圖 C，用不同濃度 Sal 預(yù)處理細(xì)胞 24h 后，加入終濃度為 300μM MPP+處理胞 24h，篩選出 60μM 的 Sal 能夠降低 MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞活力下降，差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.01）。2 Hoechst 染色檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化：

紅景天苷通過 DJ-1/Akt 通路保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元的實(shí)驗(yàn)研究表與對(duì)照組對(duì)比，P＜0.01；#代表與MPP+組對(duì)比，P＜0.05。用 Hoechst33258 染色試劑盒進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)評(píng)估。經(jīng)染色后，Control 組和al 組細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常、均勻的藍(lán)色，規(guī)則橢圓或圓形形態(tài)，兩組無明顯差；MPP+組用 300μM MPP+單獨(dú)處理 24h 后，出現(xiàn)較多的凋亡細(xì)胞，其特征是胞形態(tài)變小，細(xì)胞核碎裂，染色質(zhì)凝聚等；60μM Sal 預(yù)處理 24h 后，凋亡細(xì)胞目減少。結(jié)果表明，Sal 預(yù)處理減輕 MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性（P＜0.05）。.3 流式細(xì)胞術(shù)（Annexin V-EGFP）檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平：


本文編號(hào)：3138832