發(fā)布時間：2020-11-15 03:10

　　 目的:基于觀察體外TGF-β_1誘導的HK-2細胞損傷模型,并結(jié)合鱷嘴花新鮮藥物對于阿霉素誘導的腎病綜合征(NS)大鼠模型的治療作用及其相應(yīng)的作用機制,評價鱷嘴花鮮藥對腎纖維化的保護作用,為鱷嘴花的臨床應(yīng)用和進一步開發(fā)提供實驗依據(jù)。方法:主要分為兩大部分展開研究:(1)鱷嘴花鮮榨汁(CN)對HK-2細胞抗增殖作用的實驗研究a大鼠經(jīng)CN提取物連續(xù)灌胃7天,于末次給藥1 h后,采用腹主動脈采血,以制備含藥血清。b取對數(shù)生長期的HK-2細胞進行分組,即細胞對照組、模型對照組、CN不同濃度組及含藥血清高、中、低劑量組。除了空白對照組以外,其余各組均采用TGF-β_1造模,48 h后終止造模,所有組均加入與之相對應(yīng)的藥物,干預(yù)48 h后終止培養(yǎng),隨后采用CCK-8法檢測細胞的存活率及生長狀態(tài)。(2)CN藥液對腎病綜合征保護作用的藥效作用及機制研究將大鼠按體重隨機分組,即空白對照組、模型對照組、醋酸潑尼松組、CN高劑量組、CN中劑量組、CN低劑量組,每組10只。除空白對照組以外,其余各組通過尾靜脈注射阿霉素的方法來建立大鼠腎病綜合征模型,造模第5周開始給予藥物干預(yù)。分別于給藥第1、2、3、4、5周,分別檢測大鼠的體重、24 h尿蛋白,并于給藥5周后檢測血清白蛋白、尿素氮、肌酐、總膽固醇、甘油三酯、鈉、鉀、氯及腎臟指數(shù)等相關(guān)作用的指標;之后留取腎臟組織標本,用于做光鏡的檢查及免疫組化,并應(yīng)用Western blotting方法觀察腎臟組織中α-SMA、E-cadherin蛋白含量的表達情況的變化。結(jié)果:(1)CN提取物含藥血清及CN提取物直接給藥均對HK-2細胞增殖有明顯抑制作用。(2)模型對照組24 h尿白蛋白含量逐漸增加,血清總膽固醇、肌酐、尿素氮、甘油三酯的含量均有所升高,并于第5周達到高峰;血清白蛋白的含量有所下降,于第5周達到最低值。(3)給藥后,模型對照組24 h尿白蛋白量逐漸升高,并于造模第4周達到高峰,同一時間點的醋酸潑尼松組、CN各劑量組明顯低于模型對照組,與模型對照組相比較,24 h尿白蛋白,血清白蛋白,總膽固醇,尿素氮,甘油三酯,肌酐的含量變化有統(tǒng)計學意義。光鏡下可見模型對照組有明顯損傷,與模型對照組比較,CN各劑量組的腎損傷有所改善,給予CN的各劑量組的α-SMA蛋白水平均明顯降低,CN高劑量組效果更佳,E-cadherin蛋白的表達顯著升高。結(jié)論:1采用分兩次尾靜脈注射阿霉素的方法,可以成功地復(fù)制阿霉素腎病綜合征模型,且所用時間較短,與人類腎病綜合征表現(xiàn)更為接近。2鱷嘴花可以改善腎病綜合征的高蛋白尿癥狀,減輕腎臟損傷,延緩腎病綜合征腎小管上皮轉(zhuǎn)分化腎間質(zhì)纖維化的進程。3鱷嘴花可以通過上調(diào)腎組織中E-cadherin蛋白含量的表達,下調(diào)α-SMA蛋白水平,抑制腎病綜合征大鼠腎臟腎小管上皮細胞分化,從而延緩腎間質(zhì)纖維化。
【學位單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1 腎小管上皮細胞-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化（EMT）在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展中作用EMT 主要表現(xiàn)為：細胞形態(tài)的改變，E-cadherin 表達量的減少，基底膜斷裂α-SMA 蛋白的重新表達，肌動蛋白微絲重組以及細胞遷移和浸潤性增加。其中以細胞形態(tài)的改變、E-cadherin 含量表達的減少和α-SMA 的重新表達作為 EMT 的重要志（見圖 2）。E-黏性蛋白表達的下調(diào)和α-SMA 的上調(diào)是 EMT 的特征性標志之一。

圖 2 腎小管上皮細胞-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化（EMT）的表現(xiàn)鱷嘴花作為一味治療腎臟疾病的新中藥，其藥效作用及作用機制鮮有報道，作用機制更是尚未明確。本文首次采用動物實驗、體外細胞實驗從 EMT 信號通路角度全面闡明了鱷嘴花鮮藥水提取物改善阿霉素（ADR）引起的 NS 腎臟纖維化的分子機制此外，本文還從整體、細胞、分子三個層次，從細胞黏附分子α-SMA、E-cadherin 角度深入研究了鱷嘴花對腎損傷的保護作用及作用機制，為腎臟疾病的治療提供了新的思路。本課題通過阿霉素 NS 大鼠模型，以活血藥鱷嘴花為代表，考查鱷嘴花對 NS 大鼠的藥效作用，并應(yīng)用 Western blotting 法測定鱷嘴花對大鼠腎臟細胞黏性分子α-SMA、E-cadherin 蛋白含量表達的影響，探討了鱷嘴花對 NS 的作用機理，是本課題的創(chuàng)新之處，為鱷嘴花的臨床應(yīng)用及發(fā)展奠定了一定的基礎(chǔ)。

CN 高劑量組圖 3 鱷嘴花對 HK-2 細胞1.3.2 鱷嘴花藥液對 TGF-β1誘導 HK-2 細CN 含藥血清干預(yù) 24 h、48 h、72 h 的經(jīng)單因素方差分析，24 h 五組間 OD ＜0.05），五組間的均值總體比較有統(tǒng)計經(jīng) Dunnett’s -T3 檢驗，結(jié)果顯示，與空白
【參考文獻】

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1 王賢兒;鐘希文;張文霞;汪亞飛;;基于憂遁草化學成分研究分析其抗腫瘤作用[J];中國藥房;2013年43期

2 黃達;潘征;藍景生;何金龍;韋寶敏;;瑞舒伐他汀對TGF-β1誘導的新生大鼠心臟成纖維細胞增殖及其膠原合成與分泌的作用和機制[J];中國動脈硬化雜志;2013年07期

3 朱碧紅;張慧芳;陳永平;;大鼠肝纖維化組織中TGF-β1的研究[J];中國微生態(tài)學雜志;2013年02期

4 易博;徐文彤;鄧盾;鄧濤;;鱷嘴花葉氨基酸和微量元素分析及其化學成分研究[J];解放軍藥學學報;2012年05期

5 宋小樂;;TGF-β_1/Smad信號轉(zhuǎn)導通路對腎間質(zhì)纖維化的影響[J];南昌大學學報(醫(yī)學版);2011年06期

6 楊維娜;于琳華;郭尚溫;成少利;柴云;;改良阿霉素腎病大鼠模型的建立[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2009年04期

7 梁學書;;試述難治性腎病綜合征辨治中的六大辯證關(guān)系[J];浙江中醫(yī)雜志;2009年08期

8 鄧躍毅;林釤;;腎臟病治療激素抵抗與依賴的中醫(yī)藥應(yīng)用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2009年04期

9 韓敏;徐鋼;曾銳;劉蔚;;β-連環(huán)素酪氨酸磷酸化調(diào)控E-鈣黏蛋白表達參與轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導的人腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化[J];中華腎臟病雜志;2006年08期

10 王彩云,鄧虹珠,李輝;胡枝子總黃酮治療大鼠微小病變型腎病綜合征的實驗研究[J];中國中藥雜志;2005年08期

本文編號：2884275