目的:從枳殼中分離純化枳殼均一多糖CALB-2,并對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析、形態(tài)表征及生物活性的研究。方法:采用熱水提取法從中藥枳殼中提取枳殼粗多糖(CALB),經(jīng)陰陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、離子交換瓊脂糖凝膠以及丙烯葡聚糖凝膠等分離純化技術(shù)得到枳殼均一多糖CALB-2;利用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定CALB-2的相對(duì)分子質(zhì)量,采用甲基化分析和Smith降解對(duì)CALB-2進(jìn)行單糖組成分析,通過(guò)紅外光譜掃描(IR)分析和電鏡掃描技術(shù)(SEM)對(duì)CALB-2進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析及形態(tài)表征,并通過(guò)H2O2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞氧化損傷模型對(duì)CALB-2抗氧化活性進(jìn)行研究。結(jié)果:經(jīng)HPLC測(cè)定CALB-2為均一多糖,其相對(duì)分子質(zhì)量為3. 57×107Da。綜合運(yùn)用IR光譜分析、甲基化分析和Smith降解得到CALB-2為多支結(jié)構(gòu)的酸性多糖,且主要以1→3,4鍵型存在。分子形態(tài)考察結(jié)果顯示CALB-2為非晶態(tài)固體。體外活性結(jié)果表明CALB-2可明顯減緩H2O2所致心肌細(xì)胞的氧化損傷作用。結(jié)論:枳殼多糖CALB-2為多支結(jié)構(gòu)的均一酸性多糖,且具有一定抗心肌細(xì)胞氧化損傷的作用,以上發(fā)現(xiàn)為枳殼多糖進(jìn)一步地深入研究奠定了理論基礎(chǔ)。
【部分圖文】：

CALB-2的紅外光譜中3400 cm-1左右可見(jiàn)1個(gè)較強(qiáng)的寬吸收峰，為O-H的伸縮振動(dòng)，提示CALB-2存在分子內(nèi)或分子間氫鍵；3 000～2 810 cm-1有1個(gè)弱吸收峰，為不對(duì)稱(chēng)C-H伸縮振動(dòng)，是糖類(lèi)成分的特征性吸收峰；1 620,1 420,1 330 cm-1以及1 240 cm-1處的吸收峰均為-COOH，表明CALB-2中有-COOH存在。另外，有3個(gè)強(qiáng)吸收峰出現(xiàn)在1 110～1 010 cm-1，表明為吡喃型的糖環(huán)構(gòu)型；960～950 cm-1出現(xiàn)的吸收峰可能是呋喃糖的骨架振動(dòng)；880～900 cm-1處和860 cm-1左右的吸收峰分別為β-端基和α-端基差向異構(gòu)的C-H變角振動(dòng)峰；765 cm-1處的吸收峰為D-吡喃環(huán)。以上分析表明CALB-2可能是一種多支鏈結(jié)構(gòu)的酸性多糖。見(jiàn)圖1。3.3 高碘酸氧化和Smith降解結(jié)果

經(jīng)H2O2誘導(dǎo)后，H9c2細(xì)胞活力減弱至63.85%，與空白組相比出現(xiàn)顯著性差異；與模型組比較，CALB-2高、中劑量組（40,20 mg·L-1）處理后心肌細(xì)胞活力分別達(dá)到84.61%和77.41%，說(shuō)明CALB-2能顯著抑制H2O2對(duì)心肌細(xì)胞的損傷作用（P<0.01),CALB-2低劑量組則無(wú)顯著性差異，說(shuō)明CALB-2可有效減緩H2O2對(duì)心肌細(xì)胞造成的氧化損傷，并呈劑量依賴(lài)性。見(jiàn)表5。4 討論
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