[目的]觀察炎性環(huán)境下小白菊內(nèi)酯(PAR)對(duì)肌腱干細(xì)胞成骨分化的作用,探索其對(duì)骨肌腱接點(diǎn)損傷修復(fù)的作用及其信號(hào)通路。[方法]利用膠原酶法結(jié)合低密度接種法分離肌腱干細(xì)胞,體外驗(yàn)證分離細(xì)胞的成骨、成脂分化能力;TNF-α構(gòu)建的炎性環(huán)境下,設(shè)置不同濃度組小白菊內(nèi)酯(PAR)刺激人肌腱干細(xì)胞,用qRT-PCR檢測(cè)炎癥相關(guān)基因以及肌腱、成骨相關(guān)基因的表達(dá),及Western Blot檢測(cè)Run x2、β-catenin蛋白的表達(dá)以檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞信號(hào)通路。[結(jié)果]成功從人肌腱組織分離培養(yǎng)出干細(xì)胞。qRT-PCR檢測(cè)顯示,100 ng/ml TNF-α可引發(fā)炎癥反應(yīng),PAR能抑制炎性相關(guān)基因COX-2、HIF-2α的表達(dá),促進(jìn)了成骨相關(guān)基因Run x2、OPN的表達(dá),與TNF-α組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而肌腱相關(guān)基因Col I、Scleraxis的表達(dá)較復(fù)雜,與TNF-α組相比,下調(diào)了Col 1α水平,卻上調(diào)Scleraxis水平。Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與TNF-α組對(duì)比,PAR顯著增加蛋白R(shí)un x2、β-catenin的表達(dá)(P0.05)。肌腱干細(xì)胞在體外可被誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化。鏡下觀察茜素紅S染色,PAR組均有紅色鈣鹽沉積,相比之下對(duì)照組及TNF-α組基本無(wú)或出現(xiàn)少量鈣鹽沉積。[結(jié)論]炎性環(huán)境下小白菊內(nèi)酯能控制TNF-α引起的炎性反應(yīng)并可能通過(guò)β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)肌腱干細(xì)胞的成骨分化。
【部分圖文】：

結(jié)晶紫染色顯示約有1.3%分離出的細(xì)胞形成單細(xì)胞克隆，克隆內(nèi)細(xì)胞形態(tài)較為均一；原代細(xì)胞呈梭形，擴(kuò)增傳代后，肌腱干細(xì)胞可呈特征性的旋渦狀生長(zhǎng)（圖1）。2.2 qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果

培養(yǎng)7 d后，成骨相關(guān)基因mRNA的qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果見圖4，與對(duì)照組相比較，TNF-α+PAR 5μmol/L組均能上調(diào)Runx2、OPN的m RNA轉(zhuǎn)錄水平，分別為對(duì)照組的（1.43±0.06）、（3.07±0.29）倍（P<0.05),TNF-α+PAR 10μmol/L組也能上調(diào)Runx2、OPN的mRNA轉(zhuǎn)錄水平，分別為對(duì)照組的（1.76±0.13）、（1.91±0.18）倍（P<0.05）。與TNF-α相比，TNF-α+PAR 5μmol/L組上調(diào)的Runx2、OPN的mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而TNF-α+PAR 10μmol/L組僅上調(diào)的Runx2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。圖3 肌腱相關(guān)基因mRNA的qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果

肌腱相關(guān)基因mRNA的qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果
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