Ⅱ型糖尿病(T2DM)已成為全球流行性疾病之一,胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)是T2DM發(fā)生和發(fā)展的驅(qū)動(dòng)性因素,因此尋找通過(guò)改善IR治療T2DM的活性物質(zhì)是糖尿病藥物開(kāi)發(fā)的重要策略和方向。滇結(jié)香花是民族藥用植物,在降血糖、降血脂的輔助治療方面呈現(xiàn)出良好的功效,已有相關(guān)研究報(bào)道滇結(jié)香花提取物通過(guò)抑制α-葡萄糖苷酶活性、激活過(guò)氧化酶體增殖受體(PPARβ/γ)等方面治療T2DM。本研究在課題組前期的工作基礎(chǔ)上,結(jié)合滇結(jié)香活性成分的研究報(bào)道,提出其可能通過(guò)改善IR達(dá)到降糖效果從而治療T2DM。因此,本文建立肌細(xì)胞IR細(xì)胞模型,嘗試從滇結(jié)香花不同溶劑提取物中篩選可以改善IR的組分,并對(duì)其體內(nèi)、外降糖機(jī)制進(jìn)行研究,為滇結(jié)香花治療T2DM提供依據(jù)。主要研究工作如下:(1)建立肌細(xì)胞IR模型并評(píng)價(jià)滇結(jié)香花不同溶劑提取物的體外降糖活性。首先比較五種不同分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)C2C12成肌細(xì)胞分化為肌細(xì)胞,通過(guò)細(xì)胞形態(tài)、肌酸激酶活力和肌分化過(guò)程中基因及蛋白表達(dá)等指標(biāo),確定含2%馬血清的高糖DMEM培養(yǎng)基作用成肌細(xì)胞5-7天為最佳誘導(dǎo)分化條件;然后利用0.75 mM棕櫚酸作用肌細(xì)胞16 h建立穩(wěn)定的IR細(xì)胞模型并評(píng)價(jià)滇結(jié)香花不同溶劑提取物的降糖活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)滇結(jié)香花正己烷提取物(EGH)具有良好的降糖活性,在濃度為25-200μg/m L范圍內(nèi)可顯著增加C2C12/IR細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗和攝取,且具有明顯的劑量依賴(lài)性。(2)采用兩種T2DM小鼠模型對(duì)EGH進(jìn)行體內(nèi)降糖活性評(píng)價(jià)。其一是利用高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量鏈脲佐菌素腹腔注射誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠建立化學(xué)誘導(dǎo)型T2DM小鼠模型;其二是選用db/db小鼠作為自發(fā)型T2DM小鼠模型。EGH設(shè)置三個(gè)劑量(40、80和160 mg/kg/day),灌胃治療4周后,小鼠空腹血糖值、口服糖耐量、糖化血紅蛋白均下降且呈劑量依賴(lài)性,表明EGH具有較好的降糖活性;檢測(cè)IR相關(guān)指標(biāo)(空腹胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、胰島素分泌指數(shù)和胰島素敏感指數(shù))及HE染色發(fā)現(xiàn)EGH能夠修復(fù)損傷胰島組織促進(jìn)胰島素釋放,提高組織對(duì)胰島素的敏感性從而改善IR;EGH治療后小鼠血清游離脂肪酸、總膽固醇和甘油三酯含量顯著降低說(shuō)明EGH可有效調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝。同時(shí)EGH可促進(jìn)小鼠肌組織中胰島素受體(IRs)和胰島素受體底物-1(IRS-1)發(fā)生磷酸化,促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(Glut4)的表達(dá),增加肌組織對(duì)葡萄糖的攝取。(3)篩選EGH中的降糖活性組分并探究其作用機(jī)制。對(duì)EGH的降糖機(jī)制進(jìn)行初步探究后采用硅膠柱層析對(duì)EGH進(jìn)行分離得到5個(gè)組分(Fr.1-Fr.5),采用肌細(xì)胞IR模型對(duì)Fr.1-Fr.5進(jìn)行體外降糖活性評(píng)價(jià)。濃度為12.5-100μg/mL的Fr.1、Fr.3和Fr.5均能提高C2C12/IR細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗量和攝取量,其中Fr.1效果最佳,Fr.3次之。進(jìn)一步探究Fr.1降糖作用機(jī)制,發(fā)現(xiàn)Fr.1可以促進(jìn)IRs、IRS-1磷酸化激活胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶(PI3K),抑制下游負(fù)調(diào)節(jié)抑癌基因蛋白(PTEN)磷酸化并促進(jìn)磷酸肌醇依賴(lài)性蛋白激酶1(PDK1)磷酸化,進(jìn)一步促進(jìn)下游蛋白蛋白激酶B(AKT)和糖原合成酶激酶3β(GSK 3β)磷酸化,激活PI3K/AKT信號(hào)通路。Fr.1還能促進(jìn)腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)及其底物乙酰輔酶A羧化酶(ACC)磷酸化激活A(yù)MPK信號(hào)通路。綜上所述,Fr.1可以激活PI3K/AKT和AMPK信號(hào)通路促進(jìn)Glut4對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)從而改善IR達(dá)到治療T2DM的目的。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：R285
【部分圖文】：

T2DM）、妊娠型糖尿病（Gestaional diabetes me尿病[2]，其中 T2DM 患者最多，占 DM 總?cè)藬?shù)的 90%人患 DM，其中 T2DM 患者達(dá) 3.7 億[4, 5]。IR 和胰島素分泌相對(duì)不足，導(dǎo)致機(jī)體不能有效利用胰島臨床上主要表現(xiàn)為高血糖[7]，機(jī)體長(zhǎng)期處于高血糖狀態(tài)�。ㄗ悴克[、壞疽）、腎�。I功能損傷、衰竭）、眼腦血管病變）、動(dòng)脈硬化性心臟病、皮膚病、口腔病變等DM 主要有兩個(gè)因素：①遺傳（子宮內(nèi)環(huán)境、表觀(guān)遺傳變運(yùn)動(dòng)缺乏、高脂肪的膳食結(jié)構(gòu)、年齡、線(xiàn)粒體功能障礙發(fā)病早期有兩個(gè)階段，第一階段機(jī)體出現(xiàn) IR，隨著葡萄在體內(nèi)逐漸堆積進(jìn)入第二階段，機(jī)體胰島素代償性分泌，表現(xiàn)為血糖持續(xù)升高演變?yōu)?T2DM。由此可見(jiàn) IR 先致其他病理、生理發(fā)生改變。同時(shí)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)己經(jīng)從分子M 發(fā)病的基本環(huán)節(jié)和顯著特性，貫穿于 T2DM 發(fā)展的始主要因素[9]。

能力下降[13]。如圖 1-2[14]，促炎細(xì)胞因子、類(lèi)酶，包括細(xì)胞因子信號(hào)抑制物（SOCS），絲氨c-Jun 氨基末端激酶 JNK、核因子 κB 抑制劑激酶可以抑制胰島素受體（IRs）與胰島素受體磷脂酰肌醇激酶/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶（PI3糖異生，減弱葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 2（Glut2）轉(zhuǎn)運(yùn)

圖 1-3 骨骼肌 IR 的分子作用機(jī)制[15]Fig.1-3 Molecular mechanisms of skeletal muscle IR組織作為能量?jī)?chǔ)存的主要器官參與多種病理生理過(guò)程，脂肪組的敏感性下降。如圖 1-4[16]，一方面脂肪細(xì)胞釋放游離脂產(chǎn)物（二�；视停窠�(jīng)酰胺）并大量積累。脂質(zhì)代謝產(chǎn) 及 JNK 蛋白激酶，從而抑制下游 PI3K/AKT 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生的炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（轉(zhuǎn)錄激活因子 3（STAT3）從而增加 SOCS3 蛋白的表達(dá)，絲氨酸磷酸化使脂肪組織產(chǎn)生 IR。
【參考文獻(xiàn)】

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6 盧昉;氣陰兩虛證及脾虛痰濕證2型糖尿病動(dòng)態(tài)血糖譜的特點(diǎn)[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2868771