發(fā)布時間：2020-11-02 15:44

　　 縮泉丸出自《婦人良方》,由鹽益智仁、烏藥、山藥組成。方中君藥益智仁炮制品的選擇是影響其臨床療效的關鍵,因益智仁生品主入脾經,主治脾虛而不能統(tǒng)攝涎唾的口涎自流;益智仁鹽炙后主入腎經,主治腎虛小便清長,夜尿頻多或遺尿。在國家十一五科技支撐和自然科學基金面上項目的支持下,課題組多層次多角度闡明了益智仁“生品入脾·止瀉,鹽炙入腎·縮尿”中藥炮制理論的科學內涵。本課題在前期益智仁“鹽炙入腎”的研究基礎上,從復方角度出發(fā),以縮泉丸“補腎縮尿”的功效為切入點,研究縮泉丸中益智仁鹽炙的科學性和“鹽炙入腎-腎主水”的作用機理。目的本課題為國家自然科學基金面上項目“基于益智仁鹽炙前后及分別組成縮泉丸來研究‘鹽炙入腎-腎主水’的機制”(81473353)的一部分,對縮泉丸中益智仁鹽炙科學性和“鹽炙入腎-腎主水”作用機理進行研究。課題組前期已初步確定了縮泉丸的藥效部位及炮制前后物質基礎的差異。本文在前期研究的基礎上,通過比較益智仁鹽炙前后組成的縮泉丸對腎陽虛多尿模型大鼠腎和膀胱功能及機體水液代謝的改善作用的差異,體內藥動學過程的差異等探討縮泉丸中益智仁鹽炙的科學性及“鹽炙入腎-腎主水”的作用機理。方法采用文獻學、藥理學和化學相結合的手段開展益智仁鹽炙前后組成縮泉丸研究“鹽炙入腎-腎主水”作用機理。1進行文獻研究,整理古方縮泉丸主治病癥、縮泉丸中益智仁和全方的研究進展、“鹽炙入腎”研究進展、“腎主水”研究進展等內容,為開展益智仁鹽炙縮泉丸增強“鹽炙入腎-腎主水”作用的機理研究提供理論依據。2采用藥理學方法,建立兩種大鼠多尿模型,驗證縮泉丸溫腎縮尿的藥理作用,并比較鹽炙前后作用差異。3運用ELISA(酶聯(lián)免疫檢測)測定益智仁鹽炙前后組成的縮泉丸血中β_2-微球蛋白(β_2-MG)、白細胞介素Ⅱ(IL-2)、血清免疫球蛋白G(IgG)含量;HE染色法測定腎臟、睪丸、胸腺、脾臟的病理形態(tài)。從益智仁鹽炙前后組成的縮泉丸對模型大鼠腎臟和睪丸病理形態(tài)、腎功能、免疫功能三個方面的影響,探討縮泉丸中益智仁鹽炙對于腎臟的影響,闡明縮泉丸中益智仁“鹽炙入腎”的作用機理。4從分子水平出發(fā),運用實時熒光定量PCR(qPCR)和蛋白質印跡法(WB)等方法比較益智仁鹽炙前后組成的縮泉丸對模型大鼠腎臟水通道蛋白-2(AQP-2)mRNA及蛋白的表達;離體膀胱逼尿肌細胞M_3R和β_3-AR mRNA及蛋白的表達以及對HPA軸的影響,從益智仁鹽炙前后組成的縮泉丸對機體水液代謝的影響,闡明縮泉丸中益智仁鹽炙“腎主水”的作用機理。5從藥代動力學出發(fā),運用在體單向腸灌流實驗研究縮泉丸有效部位圓柚酮(NK)和烏藥醚內酯(LD)的腸吸收特征及炮制對腸吸收的影響,闡明益智仁鹽炙前后組成縮泉丸腸吸收的變化。運用HPLC-QQQ-MS測定血液中楊芽黃素(TC)、白楊素(CS)、11,12-二羥基圓柚酮(DNK)、LD、NK的含量;同時測定尿液和糞便中LD、DNK和NK的含量。通過對藥物在體內的代謝特征,以及對于糞便、尿液的排泄影響,比較益智仁鹽炙前后組成縮泉丸代謝差異,闡明益智仁鹽炙對于縮泉丸主要藥效成分在體內動態(tài)變化規(guī)律的影響。結果1縮泉丸石油醚部位能顯著延長首次排尿時間(P0.05);顯著降低ACH激動的豚鼠膀胱逼1對水負荷多尿模型大鼠,與模型組相比,各給藥組能夠延長水負荷模型大鼠首次排尿時間(P0.05),但總排泄率無顯著性差異(P0.05);對腎陽虛多尿模型大鼠,與模型組相比,給藥后尿量顯著減少(P0.05)。表明縮泉丸具有―縮尿‖作用,且縮泉丸中君藥益智仁鹽炙后作用有增強的趨勢。2縮泉丸對腎陽虛多尿模型大鼠腎臟、睪丸指數(shù)的改變均有顯著抑制作用(P0.05),對腎臟和睪丸病理損傷有顯著的改善(P0.05),并且顯著降低血清中BUN、β_2-MG含量(P0.05),IL-2、IGg含量(P0.05),且益智仁鹽炙后組成的縮泉丸作用增強,從大鼠腎臟和睪丸病理形態(tài)、腎功能、免疫功能三個方面的影響闡明縮泉丸中益智仁“鹽炙入腎”作用機理。3縮泉丸上調腎陽虛多尿模型大鼠腎臟AQP-2 mRNA和蛋白的表達(P0.05);調整M3、β3-AR mRNA和蛋白表達(P0.05)使膀胱保持正常的收縮和舒張功能;顯著升高CRH、ATCH和cAMP濃度(P0.05),從而調整尿液的生成,且益智仁鹽炙后組成的縮泉丸作用增強,從機體水液代謝的影響闡明縮泉丸中益智仁鹽炙“腎主水”的作用機理。4縮泉丸石油醚部位中NK、LD在各腸段吸收均較好;與益智仁生品縮泉丸相比,益智仁鹽炙縮泉丸中圓柚酮K_a和P_(eff)增大(P0.05);烏藥醚內酯的P_(eff)增大(P0.05),從吸收角度闡明鹽炙科學性。5益智仁鹽炙縮泉丸主要入血成分DNK、NK在血中的半衰期(t_(1/2))、血藥濃度-時間曲線下面積(AUC_(0-t))、體內平均滯留時間(MRT)顯著高于益智仁生品縮泉丸(P0.05),而消除率(CL)顯著低于益智仁生品縮泉丸(P0.05);LD在血中的CL、MRT藥動學參數(shù)與益智仁生品縮泉丸相比也有顯著性差異(P0.05);益智仁鹽炙后組成的縮泉丸生物利用度均有不同程度增加,從體內變化角度闡明鹽炙科學性。結論1益智仁鹽炙后組成的縮泉丸其縮尿作用增強,是通過改善腎臟和睪丸病理損傷,改善腎功能,提高免疫功能,三個方面增強藥物“補腎”作用的,從藥物鹽炙增強“補腎”作用方面闡釋了中藥炮制理論“鹽炙入腎”的作用機理。2腎臟主持和調節(jié)一身水液,鹽炙后補腎作用增強,可以調節(jié)機體的水液代謝平衡,益智仁鹽炙后組成的縮泉丸增強水液代謝平衡是通過提高腎臟AQP-2的表達增加對水的重吸收,調節(jié)膀胱逼尿肌受體的表達維持膀胱正常收縮和舒張的功能,調節(jié)神經內分泌功能,三個方面進行全身的水液代謝調節(jié)的,佐證了“腎主水”的中醫(yī)理論,并從水液代謝調節(jié)方面闡述了“腎主水”的作用機理。3益智仁鹽炙后組成的縮泉丸不僅提高了君藥益智仁入血成分生物利用度,同時還提高了配伍藥物的生物利用度,益智仁鹽炙縮尿作用增強可能與生物利用度增加有關,從藥動學過程揭示了益智仁鹽炙后組方的科學性。
【學位單位】：成都中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

各組大鼠體重變化（x—±sdn=8）

潤無炎性細胞浸潤圖3-1 各組大鼠腎臟HE病理切片圖及組織學評分（x—±sd n=8（）1正常組，2模型組，3JGSQW組，4 R-SQW 組，5 P-SQW 組）Fig.3-1 Pathologics figureand Histological Scoring of different groups（x—±sd n=8）注：▲示與正常組比較 P<0.05，*與模型組比較 P<0.05。結果經過對抗性給藥治療后，給藥組均能對腺嘌呤致腎臟嚴重病變（腎小球壞死、腎小管壞死、間質增生和炎性細胞浸潤等）有一定的抑制作用。通過組織

鼠睪丸 HE病理切片圖（x—±sd n=8）（1 正常組，2 模型組，3JGSQW 組，組，5 P-SQW 組）Fig.3-2 Pathologics figureand of different groups（x—±sd n=8）丸組織病變分級標準，結果正常組大鼠睪丸評分為 0.33，模型
【參考文獻】

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本文編號：2867240