發(fā)布時間：2020-11-02 04:05

　　 中藥益智仁,又名益智、益智子,姜科、山姜屬的多年生草本植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的果實,收載于《中國藥典》2015版,為衛(wèi)生部101個首批藥食同源品種,為我國四大南藥之一。益智具有補腎、攝唾、固精、縮尿的功效。按照“腦為髓海”的說法,我們查閱文獻發(fā)現(xiàn),補腎藥物多有神經(jīng)保護、提高智力的作用。而益智仁,民間稱謂“益智”,有用于提高記憶力的記載。因此,我們對益智中有效成分進行提取分離鑒定和神經(jīng)保護藥效篩選,并進行機制探討。我們從益智仁中提取了白楊素、圓柚酮、楊芽黃素等6種主要成分。采用我們課題組前期構(gòu)建啟動子篩選模型進行初篩的結(jié)果顯示:白楊素的最佳濃度是1μM,可以將NF (神經(jīng)因子)啟動子上調(diào)2.21倍。圓柚酮的最佳濃度是1μM,可以將NF啟動子上調(diào)2.3倍。楊芽黃素的最佳濃度是1μM,可以將NF啟動子上調(diào)1.6倍。在此基礎(chǔ)上我們以大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(rMSCs)為模型細胞進行神經(jīng)保護功能的進一步驗證。實時定量PCR的結(jié)果顯示,白楊素、圓柚酮這2種單體在1μM的濃度下,均能夠一定程度上促進五種神經(jīng)標志物的轉(zhuǎn)錄水平,并體現(xiàn)出一定的劑量依賴性。在給藥72h的時候mRNA的轉(zhuǎn)錄水平達到高峰,效果優(yōu)于陽性對照(全反式維甲酸)。免疫熒光的實驗表明,在骨髓間充質(zhì)干細胞被誘導72h的時候,五種神經(jīng)標志物所對應(yīng)的蛋白也均被檢測到。由此可見,這兩種化合物具有一定的誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞分化的能力。本研究通過篩選,初步確認了來自中藥益智仁的兩種可以誘導干細胞向神經(jīng)細胞分化的單體化合物,初步確認了益智的神經(jīng)保護、其可能促進神經(jīng)再生的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),為來自中藥的小分子化合物快速篩選提供了新方法,為中藥現(xiàn)代化和益智仁質(zhì)量標準提高提供了參考。
【學位單位】：西南交通大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

不同種類外界誘導劑存在的培養(yǎng)條件下，骨髓間充質(zhì)干細胞有向脂肪細胞、軟骨細胞分化的潛能。２００６年，國際干細胞庫定下了間充質(zhì)干定最低標準：（１）在標準培養(yǎng)條件下能夠貼壁生長。（２）能夠表達表面抗原??１０５、ＣＤ９０、ＣＤ７３、ＣＤ４４、ＣＤ２９；不表達表面抗原?ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４ｌｌｂ、ＣＤ７９ａ或ＣＤ１９、ＨＬＡ－ＤＲ。（３）能夠在特定的培養(yǎng)條件下被誘導分肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞。骨髓間充質(zhì)干細胞分化的條件分別如下２．１成骨細胞??成骨細胞誘導培養(yǎng)基配制條件如下：ＤＭＥＭ低糖培養(yǎng)基中，按照下述濃同的誘導因子：２０ｎｍｏｌ／ＬＰ－甘油隣酸二鈉、ｌｎｍｏｌ／Ｌ地塞米松、５０｜ｉｇ／ｍ血酸－２－磷酸。每３ｄ吸去舊的培養(yǎng)基換成新的培養(yǎng)基，共誘導培養(yǎng)２１?ｄ成后，用堿性磷酸酶（ＡＫＰ）染色法檢測被誘導的細胞鈣化程度，從而判能否表現(xiàn)成骨細胞的功能［５２］。??

用堿性磷酸酶（ＡＫＰ）染色法檢測被誘導的細胞鈣化程度，從而判定該??細胞能否表現(xiàn)成骨細胞的功能［５２］。??＿??圖１－２?ＡＩＣＰ染色向成骨細胞分化的骨髓間充質(zhì)干細胞??

養(yǎng)基換成新的培養(yǎng)基，共誘導培養(yǎng)２１?＆５２］。誘導完成后，用甲苯胺藍染色法檢??測軟骨化程度，從而判定該細胞能否表現(xiàn)軟骨細胞的功能［５３］。??圖１－３甲苯胺藍染色向軟骨細胞分化的骨髓間充質(zhì)干細胞??１．４．２．３脂肪細胞??按照下述濃度配制脂肪細胞誘導培養(yǎng)基：０．５?ｐｍｏｌ／Ｌ地塞米松、０．５ｎｍｏｌ／Ｌ吲??味美辛、〇．５ｍｍｏｌ／Ｌｉｓｏｂｕｔｙｌ－ｍｅｔｈｙｌ－ｘａｎｔｈｉｎｅ，加入?ＤＭＥＭ低糖培養(yǎng)基中。每３ｄ??吸去舊的培養(yǎng)基換成新的培養(yǎng)基，共誘導培養(yǎng)２１?ｄ。誘導完成后，用油紅０染??色法檢測細胞內(nèi)的脂肪滴，從而判斷該細胞能否具有積累脂肪的能力１５２］。??
【參考文獻】

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本文編號：2866549