阿爾茲海默癥(AD)作為世界第一大老年性的神經(jīng)退行性疾病,給家庭和社會帶來難以承受的負累,因此,發(fā)現(xiàn)與研發(fā)有效的抗AD藥物一直是研究熱點。文獻顯示,大馬士革玫瑰精油具有顯著的抗氧化活性,同時能夠極大地抑制乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶活性。另外,它也能夠顯著提升大鼠的學習和記憶能力,這些結果提示玫瑰精油具有抗AD的潛力。本研究利用轉入Aβ1-42基因的人源化秀麗隱桿線蟲作為AD病理模型,探討苦水玫瑰精油對于AD線蟲的治療作用,同時解析其抗AD作用機制。秀麗隱桿線蟲CL4176株系因轉入了人源Aβ1-42蛋白基因,在其體壁肌肉細胞中可過度表達Aβ1-42蛋白從而導致線蟲產(chǎn)生AD樣癥狀的麻痹表型,以苦水玫瑰精油處理CL4176株系線蟲,結果顯著抑制了受試線蟲的AD樣病理癥狀,且呈明顯的濃度依賴關系。但是,苦水玫瑰精油的兩個主要成分香茅醇和香葉醇對于AD線蟲麻痹作用的逆轉作用不及精油本身。另一轉基因秀麗隱桿線蟲株系CL2355的神經(jīng)細胞中大量表達Aβ1-42蛋白,導致該株系線蟲對外源性5-HT超敏感,以苦水玫瑰精油處理CL2355,結果顯示苦水玫瑰精油能夠顯著地扭轉因Aβ毒性造成的線蟲對于外源性5-HT的超敏感,這些結果支持苦水玫瑰精油對AD線蟲具有顯著的治療作用。采用肌肉細胞中組成型表達人源Aβ1-42蛋白的CL2006株系線蟲模擬AD的進行性病程,檢測苦水玫瑰精油對Aβ蛋白在線蟲體內異常沉積的影響。結果表明苦水玫瑰精油能夠顯著地抑制Aβ的異常沉積。采用RNAi敲低CL4176株系線蟲skn-1、daf-16和hsf-1基因表達,結果顯示苦水玫瑰精油對于skn-1被敲低后的線蟲麻痹行為的逆轉作用消失,而daf-16和hsf-1基因敲低則無影響。同時,苦水玫瑰精油可顯著誘導SKN-1核轉位激活及其下游gst-4基因的表達上調。最后,WB實驗的結果證明苦水玫瑰精油顯著下調秀麗隱桿線蟲體內高毒的Aβ寡聚體的水平,以此減輕Aβ蛋白對機體的損傷。采用RNAi敲低skn-1的表達,這一作用消失。這些研究結果表明SKN-1信號通路參與苦水玫瑰精油對AD線蟲的治療作用。本研究的結果將為苦水玫瑰精油的二次開發(fā)及應用提供有力的數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)。
【學位單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 芳香類精油概況
    1.2 芳香類物質的藥理學活性研究概況
    1.3 阿爾茲海默癥及抗阿爾茲海默癥藥物研究進展
    1.4 芳香類物質抗AD研究進展
    1.5 玫瑰精油藥理學活性概況
    1.6 立論依據(jù)
第二章 苦水玫瑰精油對AD線蟲的治療作用研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料及試劑
        2.2.1. 實驗生物材料
        2.2.2 試劑、培養(yǎng)基及儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 苦水玫瑰精油藥液的制備
        2.3.2 含有苦水玫瑰精油的NGM培養(yǎng)基的制備
        2.3.3 LB固體培養(yǎng)基的制備
        2.3.4 大腸桿菌OP50的培養(yǎng)
        2.3.5 秀麗隱桿線蟲的同步化
        2.3.6 麻痹實驗
        2.3.7 苦水玫瑰精油對秀麗隱桿線蟲體內轉基因外源蛋白GFP表達的影響
        2.3.8 5-HT敏感性實驗
        2.3.9 統(tǒng)計學分析
    2.4 實驗結果
        2.4.1 苦水玫瑰精油對AD線蟲麻痹表型的影響
        2.4.2 苦水玫瑰精油對線蟲體內轉基因外源蛋白GFP表達的影響
        2.4.3 苦水玫瑰精油對AD秀麗隱桿線蟲 5-HT超敏感性的影響
        2.4.4 苦水玫瑰精油GC-MS分析
        2.4.5 苦水玫瑰精油主要成分citronellol和geraniol對AD線蟲麻痹表型的影響
    2.5 討論
第三章 苦水玫瑰精油抗AD作用的機制研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗生物材料
        3.2.2 試劑、培養(yǎng)基及儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 不同濃度苦水玫瑰精油的制備
        3.3.2 含有苦水玫瑰精油的NGM培養(yǎng)基的制備
        3.3.3 RNAi實驗LB固體培養(yǎng)基的制備
        3.3.4 RNAi實驗干擾菌的培養(yǎng)
        3.3.5 秀麗隱桿線蟲的同步化
        3.3.6 秀麗隱桿線蟲體內Aβ 蛋白沉積物數(shù)量的分析
        3.3.7 秀麗隱桿線蟲RNAi實驗
        3.3.8 秀麗隱桿線蟲DAF-16::GFP核轉位實驗
        3.3.9 秀麗隱桿線蟲SKN-1b::GFP核轉位實驗
        3.3.10 秀麗隱桿線蟲gst-4p::GFP基因表達強度分析實驗
        3.3.11 western blot實驗
        3.3.12 數(shù)據(jù)處理與分析
    3.4 實驗結果
        3.4.1 苦水玫瑰精油對秀麗隱桿線蟲咽部肌肉組織中淀粉樣斑數(shù)量的影響
        3.4.2 苦水玫瑰精油對SKN-1 分子信號通路的影響
        3.4.3 苦水玫瑰精油對DAF-16 分子信號通路的影響
        3.4.4 苦水玫瑰精油對HSF-1 分子信號通路的影響
        3.4.5 苦水玫瑰精油對AD線蟲體內Aβ 寡聚體的水平的影響
    3.5 討論
第四章 結論
參考文獻
在校期間研究成果
致謝

【參考文獻】

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本文編號：2860489