發(fā)布時(shí)間：2020-10-25 05:11

　　 目的:參考中醫(yī)古籍關(guān)于元?dú)獾恼撌?通過手術(shù)切除右腎作為元?dú)馓澨撃Ｐ?并以切除左腎作為對照組,使用培元固本健腦法進(jìn)行干預(yù),觀察klotho(kl)蛋白及相關(guān)蛋白在腎和海馬的表達(dá)和培元固本健腦法的干預(yù)效果,探討元?dú)馓澨搶δI功能、記憶功能的影響,培元固本健腦法對腎和海馬的干預(yù)作用及機(jī)制。方法:1.理論探討:通過整理中醫(yī)古籍文獻(xiàn)和研究進(jìn)展,分析中醫(yī)學(xué)元?dú)獾淖饔?現(xiàn)代疾病與元?dú)獾年P(guān)系,其他虛證動(dòng)物模型對元?dú)馓澨搫?dòng)物模型的借鑒意義,為元?dú)馓澨搫?dòng)物模型的建立提供理論基礎(chǔ)。2.實(shí)驗(yàn)研究:以空白組作為對照組,以單側(cè)腎切除大鼠作為元?dú)馓澨搫?dòng)物模型,使用培元固本健腦法進(jìn)行干預(yù),隨機(jī)分為模型組、左腎組、固本健腦方高劑量組(固高組)、固本健腦方中劑量組(固中組)和固本健腦方低劑量組(固低組)。以kl蛋白為切入點(diǎn),探索單側(cè)腎切除作為元?dú)馓澨搫?dòng)物模型的可行性;以左側(cè)、右側(cè)分別腎切除,探索命門與腎的關(guān)系;觀察單側(cè)腎切除腎功能、血常規(guī);通過自發(fā)活動(dòng)、Morris水迷宮,探討元?dú)馓澨搫?dòng)物模型的學(xué)習(xí)、記憶能力;使用ELISA方法檢測kl蛋白、TNF-α、IL-6和8-OHDG的變化;使用Real-time PCR和western blot方法,檢測腎臟、海馬kl、NF-κB和MAPK1 mRNA和蛋白表達(dá);觀察元?dú)馓澨摯笫竽I臟和海馬的病理改變。結(jié)果:1.(1)一般情況單側(cè)腎切除大鼠普遍出現(xiàn)毛發(fā)枯黃、活動(dòng)減少,部分出現(xiàn)躁動(dòng)、大便稀溏、喘息;左腎切除與右腎切除兩者之間一般情況沒有明顯差別。(2)各組不同時(shí)間點(diǎn)體重和處死后腎重的比較:術(shù)前各組體重比較,無明顯差異(p0.05);術(shù)后1周,固高組低于固低組(p0.05);術(shù)后2周、4周、6周、8周體各組間體重沒有明顯改變(p0.05)。8周處死后,腎重比較,模型組、左腎組、固高組、固中組和固低組均大于空白組(p0.05)。(3)各組大鼠腎功能、血常規(guī)檢測與模型組比較:尿素氮比較,各組之間沒有明顯差異(p0.05)。血肌酐比較,模型組、左腎組、固低組高于空白組(p0.05);左腎組、固低組低于模型組(p0.05);固中組、固高組低于模型組、左腎組和固低組(p0.05)。各組血WBC、RBC沒有差異(p0.05);Hb比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.05);固高組、固中組高于模型組、左腎組(p0.05)。2.元?dú)馓澨摯笫笮袨閷W(xué)研究及培元固本健腦法的干預(yù)作用:(1)自發(fā)活動(dòng)檢測結(jié)果:自發(fā)活動(dòng)總路程比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組低于空白組(p0.05),固高組、固中組高于模型組和左腎組(p0.05);平均速度比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組低于空白組,高于模型組和左腎組(p0.05);休息時(shí)間比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組高于空白組,少于模型組和左腎組(p0.05);中央時(shí)間,模型組、左腎組少于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組少于空白組,多與模型組和左腎組(p0.05)。(2)大鼠Morris水迷宮定位航行和空間探查實(shí)驗(yàn)結(jié)果:90s游泳找到平臺總路程比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組高于空白組,低于模型組和左腎組(p0.05);平均速度比較,模型組和左腎組比空白組慢(p0.01),固高組、固中組、固低組比空白組慢(p0.05),固高組比模型組和左腎組快(p0.05);第一次抵原平臺時(shí)間,模型組、左腎組多與空白組(p0.01),固高組、固中組、固低組比空白組慢(p0.05),比模型組和左腎組快(p0.05);穿越平臺次數(shù),模型組、左腎組少于空白組(p0.01),固高組、固中組、固低組少于空白組(p0.05),固高組、固中組多于模型組和左腎組(p0.05)。3.元?dú)馓澨摯笫笱装Y因子及氧化應(yīng)激反應(yīng)及培元固本健腦法的干預(yù)作用:ELISA法檢測血清結(jié)果:各組血清kl蛋白濃度比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01);固高組、固中組、固低組低于空白組,高于模型組和左腎組(p0.05)。血清TNF-α濃度比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組低于模型組和左腎組(p0.05)。血清IL-6濃度比較,模型組、左腎組分別高于空白組(p0.01,0.05);固高組、固中組、固低組高于空白組和模型組(p0.05);固高組低于左腎組(p0.05)。血清8-OHDG濃度比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01);固高組低于模型組和左腎組、固低組(p0.05);固中組、固低組高于空白組、低于模型組和左腎組(p0.05)。4.元?dú)馓澨摯笫竽I臟、海馬kl、MAPK1、NF-κB的表達(dá)及培元固本健腦法的干預(yù)作用Real-time PCR檢測腎臟組織結(jié)果:(1)kl mRNA比較,模型組、左腎組、固低組低于空白組(p0.01),固中組和固高組低于空白組(p0.05);固中組和固高組高于模型組和左腎組(p0.05)。(2)NF-κB mRNA比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組、固低組高于空白組(p0.05),低于模型組和左腎組(p0.05)。(3)MAPK1 mRNA比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組、固低組高于空白組(p0.05),固中組、固高組低于模型組和左腎組(p0.05)。Real-time PCR檢測海馬組織結(jié)果:(1)Kl mRNA比較,模型組、左腎組、固低組、固中組低于空白組(p0.01),固高組低于空白組(p0.05);固低組、固中組和固高組高于模型組(p0.05),固中組、固高組高于左腎組(p0.05)。(2)NF-κB mRNA比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01);固高組、固中組、固低組高于空白組,低于左腎組(p0.05)。(3)MAPK1 mRNA比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.05),固低組、固中組和固高組低于模型組(p0.05)。western blot檢測腎臟組織結(jié)果:(1)Kl比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01),固低組、固中組和固高組低于空白組(p0.05);固中組、固高組高于模型組和左腎組(p0.05)。(2)NF-κB P65比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固低組、固中組、固高組高于空白組(p0.05),低于模型組和左腎組(p0.05)。(3)MAPK1比較,模型組、空白組高于空白組(p0.05);固低組、固中組和固高組低于模型組、左腎組(p0.05)。western blot檢測海馬組織結(jié)果:(1)Kl比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01)、固低組、固中組低于空白組(p0.05);固低組、固中組、固高組高于模型組和左腎組(p0.05)。(2)NF-κB比較,模型組和左腎組高于空白組(p0.01),固低組高于空白組(p0.05);固低組、固中組、固高組低于模型組和左腎組(p0.05)。(3)MAPK1比較,模型組、左腎組、固低組、固中組和固高組均高于空白組(p0.05)。5.元?dú)馓澨摯笫竽I和海馬病理改變及培元固本健腦法的干預(yù)作用光鏡下觀察腎臟組織:空白組大鼠腎小球形態(tài)正常,腎小管形態(tài)正常。模型組腎小球增生,系膜基質(zhì)增生,細(xì)胞增生,胞漿可見紅染顆粒,近曲小管上皮細(xì)胞壞死、腫脹。左腎組腎小球肥大,細(xì)胞增多,鮑曼氏腔狹窄,腎小管形態(tài)基本正常,刷狀緣清晰。固低組腎小球肥大,紅細(xì)胞增多,毛細(xì)血管內(nèi)內(nèi)皮細(xì)胞增生,毛細(xì)血管擴(kuò)張,腎間質(zhì)無明顯改變。固中組腎小球肥大,系膜基質(zhì)增生,腎間質(zhì)無明顯改變。固高組腎小球肥大,系膜增生,毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯,腎間質(zhì)充血。光鏡下觀察海馬組織:空白組錐體細(xì)胞層次排列整齊,無明顯病理改變;模型組局部可見錐體細(xì)胞層次排列欠整齊,可見錐體細(xì)胞變性(細(xì)胞腫脹,胞漿淡染),壞死(核固縮);左腎組錐體細(xì)胞排列層次尚可,變性、壞死程度比模型組輕;固低組錐體細(xì)胞層次尚可,變性、壞死程度較模型組、左腎組輕;固中組錐體細(xì)胞層次尚可,變性、壞死程度較固低組輕;固高組錐體細(xì)胞排列層次尚可,變性壞死程度較輕。結(jié)論:(1)單側(cè)腎切除大鼠表現(xiàn)出與元?dú)馓澨撓嗨频陌Y狀,可以作為元?dú)馓澨搫?dòng)物模型的其中一種。(2)培元固本健腦法可以改善元?dú)馓澨摯笫竽I臟、腦的功能,其機(jī)制可能與促進(jìn)kl蛋白表達(dá),從而抑制炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)。(3)Kl蛋白或可作為反映元?dú)馐⑺サ膮⒖贾笜?biāo)之一,而炎癥和氧化可能是損害元?dú)獾闹饕蛩刂弧?4)左腎和右腎在腎功能、kl蛋白表達(dá)、對學(xué)習(xí)記憶的影響等方面無明顯的差別,因此左腎為腎,右腎為命門的說法仍需要進(jìn)一步研究來證實(shí)。
【學(xué)位單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

表 1-1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)體重和處死后腎臟重的比較（x±s,g）組別 術(shù)前 術(shù)后 1 周 術(shù)后 2 周 術(shù)后 4 周 術(shù)后 6 周 術(shù)后 8 周 處死后腎重空白組 369.20±25.64388.40±27.09440.00±22.15461.80±32.53487.20±35.77491.20±34.122.56±0.14模型組 361.00±25.77380.00±23.74406.40±21.92454.80±19.38489.20±28.03424.20±43.823.0440±0.22*左腎組 348.80±26.82370.00±18.66428.00±24.50459.20±29.57480.40±35.13436.00±34.863.1080±0.13*固低組 373.60±30.17408.00±22.63434.60±28.59473.40±29.51440.20±33.58447.80±32.983.0600±0.18*固中組 346.20±26.11378.00±31.64449.80±36.187470.00±37.39495.00±36.67461.60±40.423.1500±0.28*固高組 337.60±19.16354.60±17.61410.40±28.96436.40±31.64456.40±36.22486.60±40.403.0020±0.23*注：與空白組比較，*p＜0.05，與固低組比較， p＜0.05

±26.11±31.64±36.187±37.39±36.67±40.42±固高組 337.60±19.16354.60±17.61410.40±28.96436.40±31.64456.40±36.22486.60±40.403.±注：與空白組比較，*p＜0.05，與固低組比較， p＜0.05 圖 1-1 不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠體重的比較200

（p＜0.05）；固中組 固高組低于模型組 左腎組和固低組（p＜0.05） 各組血 WBC RBC 沒有差異（p＞0.05）；Hb 比較，模型組 左腎組低于空白組（p＜0.05）；固高組 固中組高于模型組 左腎組（p＜0.05） （見表 2，圖 1-3 和 1-4）表 1-2 各組大鼠腎功能、血常規(guī)的比較（x±s）組別腎功能 血常規(guī)尿素氮（mmol/L）肌酐（μmoI/L）WBC（*109/L） RBC（*1012/L）Hb（g/L）空白組 3.38±1.18 64.26±13.29 7.10±2.56 8.59±0.28 155.50±4.95模型組 4.17±1.25 86.46±14.99* 8.35±1.49 8.55±0.56 135.00±4.24*左腎組 3.78±1.65 72.21±15.53* 9.75±1.56 8.68±0.57 132.08±4.57*固低組 4.13±0.83 73.35±11.02* 10.30±2.83 9.95±1.22 146.66±8.50固中組 4.46±0.99 65.39±10.64 9.63±2.75 9.64±1.43 153.00±4.24 固高組 3.91±0.52 68.50±11.45 7.43±1.25 9.09±1.36 151.33±5.13 注：與空白組比較，*p＜0.05；與模型組比較， p＜0.05；與左腎比較， p＜0.05；與固低組比較， p＜0.05
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