研究背景鐵線蓮屬(Clematis)植物屬毛茛科(Ranunculaceae),在我國分布廣泛,化學成分復雜,在民間主要用于風濕風寒、疼痛感染等疾病的治療。甘青鐵線蓮(Clematis tangutica)為鐵線蓮屬植物的一種,主要分布于我國西部地區(qū),在藏醫(yī)藥中用于治療活血通瘀和消化不良等病癥。課題組前期對甘青鐵線蓮中的皂苷和黃酮類成分進行系統(tǒng)分離鑒定,并對得到的物質進行了活性篩選,發(fā)現(xiàn)其中一種黃酮苷成分—芹菜素-7-O-β-D-(-6''-p-香豆�；�)-吡喃葡萄糖苷(APG)具有明顯的抗氧化活性。目前,關于APG心血管保護作用及機制的研究已經取得進展,關于其腦保護作用的研究正在推進,并已在動物實驗中得到驗證,具備進一步開發(fā)為治療藥物的可能性。本課題主要從提取和合成兩個方面對APG的制備工藝進行優(yōu)化和探索,并對合成產物的腦保護作用進行驗證,為APG的生產和研究提供了一定理論和實驗依據(jù)。方法1.響應面法優(yōu)化超聲提取甘青鐵線蓮總黃酮工藝:在乙醇體積分數(shù)、提取時間、液料比三個單因素實驗的基礎上,對總黃酮提取率建立Box-Behnken中心組合實驗設計,模擬二次回歸模型,通過響應面分析,對超聲提取甘青鐵線蓮總黃酮工藝進行優(yōu)化。2.化學合成活性成分APG:通過查閱文獻和實驗探索,設計了以芹菜素、乙酰溴代葡萄糖、香豆酸乙烯酯為起始原料的APG合成路線,并對催化劑、溶劑等反應條件進行了實驗比較,在此基礎上合成目標產物APG。3.合成產物的腦保護作用研究:建立大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型,分為假手術組、缺血模型組、溶劑組、陽性對照組(r-tPA)、產物干預組。通過觀察實驗大鼠的神經行為學評分及TTC染色腦梗死面積,對合成產物芹菜素-7-O-(-6''-p-香豆�；�)-吡喃葡萄糖苷的腦保護作用進行驗證。結果1.響應面法優(yōu)化超聲提取甘青鐵線蓮總黃酮工藝:通過模型分析和可行性修正,發(fā)現(xiàn)乙醇體積分數(shù)對于總黃酮提取率影響最為顯著,得到最佳提取條件為乙醇體積分數(shù)80%,提取時間44 min,液料比30.5:1,最大提取率可達1.266%。2.化學合成活性成分APG:通過比較實驗,確定第三步反應采用Lipolase 100T脂肪酶作為催化劑、CH_3CN作為溶劑、反應時間為76h,采用黃酮特征反應、ESI-MS,結合~1H-NMR和~(13)C-NMR等理化數(shù)據(jù)驗證合成結果,最終芹菜素-7-O-(-6''-p-香豆�；�)-吡喃葡萄糖苷合成產率為42.27%。3.合成產物的腦保護作用研究:與MCAO組相比,合成產物干預組大鼠神經行為學評分顯著升高,腦梗死面積顯著減少(P0.05),表明通過此合成路線得到的APG具有腦保護作用。結論本課題利用響應面、催化合成等方法分別從提取和合成兩方面對于甘青鐵線蓮中活性成分APG的制備工藝進行了探索和優(yōu)化,利用大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型驗證了合成反應中產物的腦保護作用,對于APG的量化生產提供了實驗依據(jù),為甘青鐵線蓮的開發(fā)利用以及心腦血管新藥進一步研發(fā)提供了理論和實驗基礎。
【學位單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

中發(fā)現(xiàn)（70）。Zhao Mei[19]等從粗齒鐵線蓮（C. argentilucida）根部的正丁醇萃取部位中分離得到 1 個烏蘇烷型三萜皂苷類化合物（68）和 1 個蒲公英賽烷型三萜皂苷類化合物（69），均為新化合物，化合物 68 的 20 位雙鍵烏蘇烷型苷元結構在鐵線蓮屬植物中首次被發(fā)現(xiàn)，另有 4 個齊墩果烷型三萜皂苷類化合物（43-46）為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)。張倩[20]等從大葉鐵線蓮（C. heracleifolia）全草的正丁醇萃取部位中分離得到 4 個齊墩果烷型三萜皂苷類化合物，其中化合物 47 為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)。Zhao Min[21]等從甘青鐵線蓮（C. tangutica）全草甲醇提取物的正丁醇萃取部位中分離鑒定了 16 個齊墩果烷型三萜皂苷類化合物（9、10、12、48-60），其中化合物 48-55 為新化合物，且化合物 51-54 的 C23，28 位雙糖鏈結構在鐵線蓮屬植物中較為少見。衛(wèi)柯[22]等從美花鐵線蓮（C. potaninii）地上部分正丁醇萃取部位中分離鑒定了 5 個齊墩果烷型三萜皂苷類化合物（8、61-64），均為首次從該種植物中分離得到，其中化合物 64 為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)。化合物結構見圖 1 及表 1。

空軍軍醫(yī)大學碩士學位論文黃酮類線蓮屬植物中的黃酮類成分主要以黃酮苷的形式存在，近年研究中發(fā)主要為芹菜素、木犀草素、山柰酚、槲皮素等。牛江進[16]等從甘青鐵酯萃取部位中首次分離得到木犀草素（74）、芹菜素（71）。袁琳[23]等（C. connata）的正丁醇萃取部位中分離鑒定了 11 個黃酮苷類化合物， 4 個（76-79）、槲皮素類 2 個（80、81）、染料木素類 1 個（88、89），（85）、異牡荊素（86）和過山蕨素（87），均為首次在該種植物中分離4]等從甘青鐵線蓮（C. tangutica）全草的正丁醇萃取部位中分離鑒定了化合物，其中芹菜素類 2 個（72、73）、木犀草素類 1 個（75）、槲皮2、83）、異葒草素（85），其中化合物 73 為首次從鐵線蓮屬植物中得到次在該種植物中分離得到。蘇琨[25]等從大瓣鐵線蓮（C. macropetala）萃取部位中首次分離得到槲皮素-7-O-蕓香苷（84）�；衔锝Y構見圖 2

等從東北鐵線蓮（C. manshurica）干燥根莖的乙醇提取物中分離得到兩個新的木脂素 Clemomanshurinane C（99）和ClemomanshurinaneD（100），對脂氧化酶具有中度抑制作用。化合物結構見圖3及表3。
【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 趙科;解紅霞;張娜;;響應面法優(yōu)化黃花鐵線蓮總皂苷超聲提取工藝[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年04期

2 袁琳;黃文忠;梁德強;馬銀海;杜芝芝;;合柄鐵線蓮中黃酮苷類化學成分研究[J];中國藥學雜志;2015年06期

3 葉麗穎;騰春福;吳楠;朱扶蓉;;畬藥鐵線蓮提取物的生物活性初步研究[J];海峽藥學;2015年02期

4 張偉;陸云陽;李媛;海文利;文愛東;湯海峰;;甘青鐵線蓮的黃酮苷類成分研究[J];中南藥學;2015年01期

5 屠凌嵐;鄭曉亮;程麗艷;顏冬梅;鄭高利;;圓錐鐵線蓮對慢性非細菌性前列腺炎的治療作用及機制研究[J];天然產物研究與開發(fā);2014年11期

6 邢天天;李春磊;王義坤;郭秋霜;薛玲;;大葉鐵線蓮提取物抗炎作用實驗研究[J];山東中醫(yī)藥大學學報;2014年05期

7 牛江進;張本印;王瑛;張琳;邵赟;梅麗娟;陶燕鐸;;唐古特鐵線蓮化學成分研究[J];天然產物研究與開發(fā);2014年06期

8 于舒雁;魏榮銳;苗明三;;不同品種威靈仙水煎液外用對大鼠痔瘡、佐劑性關節(jié)炎模型的影響[J];中國現(xiàn)代應用藥學;2014年04期

9 楊林;錢嬌玲;蒲利紅;束長宇;林鵬;;棉團鐵線蓮總皂苷抗腫瘤活性研究Ⅱ[J];中醫(yī)藥學報;2013年02期

10 涂院海;楊曉軍;;黃花鐵線蓮中香豆乙酸的抗炎活性研究[J];中國現(xiàn)代中藥;2013年01期

本文編號：2855483