目的(1)觀察人參皂苷Rb1對單純性肥胖的作用;(2)探索人參皂苷Rb1在分化成熟3T3-L1脂肪細胞中對脂質轉運的作用(3)明確人參皂苷Rb1是否通過PPARγ/AQP7途徑發(fā)揮改善肥胖的作用。方法體內實驗,采用4-5周齡的C57BL/6雄性小鼠給予高脂飲食(脂肪含量60%)喂養(yǎng),構建單純性肥胖模型構,進行相應藥物(人參皂苷Rb1、PPARγ抑制劑GW9662、DMSO)處理,檢測小鼠體質量、體脂量、脂肪細胞大小,糖耐量試驗,血清學檢測血脂、血糖、肝功能變化。免疫組化分析脂肪組織內AQP7、PPARγ的定位表達,Western-blot測定脂肪組織中AQP7、PPARγ、p-PPARγ的表達量。體外實驗,采用3T3-L1細胞誘導成為成熟的脂肪細胞,不同濃度的Rb1處理篩選出最適濃度,其后將細胞分為空白對照組、Rb1組、GW9662+Rb1組、DMSO+Rb1組。油紅O染色觀察細胞內脂滴大小及其含量,ELISA試劑盒檢測細胞培養(yǎng)基中游離三酯甘油、瘦素、脂聯(lián)素表達量,Western-blot測定脂肪組織中AQP7、PPARγ、p-PPARγ的表達量。結果1.與普食對照組小鼠體質量比較,高脂飲食小鼠體質量約為普食組小鼠體質量的1-1.5倍,單純性肥胖小鼠模型造模成功。2.與對照組相比較,人參皂苷Rb1處理組(HFD+Rb1)的肥胖小鼠體質量和體脂率降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),比較HFD+Rb1組與HFD+GW9662+Rb1組肥胖小鼠體質量以及體脂率,給予肥胖小鼠PPARγ特異性抑制劑GW9662處理后可部分逆轉Rb1減輕體質量以及體脂率的作用。3.IPGTT法檢測肥胖小鼠糖耐量,與對照組比較,HFD+Rb1組肥胖小鼠血糖調節(jié)能力較強,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);而HFD+GW9662+Rb1組肥胖小鼠的血糖調節(jié)能力較HFD+Rb1組弱,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)4.HFD+Rb1組肥胖小鼠血清中游離脂肪酸水平明顯低于其他組,但TG、LDL-C、HDL-C、CHO以及血糖水平無明顯統(tǒng)計學差異。5.與對照組相比,HFD+Rb1組肥胖小鼠血清中AST和ALT水平較低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),HFD+Rb1組肥胖小鼠血清AST水平低于HFD+GW9662+Rb1組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而ALT水平未見明顯統(tǒng)計學差異6.Rb1處理組肥胖小鼠的脂肪細胞直徑明顯較對照組以及HFD+GW9662+Rb1組小,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),HFD+DMSO+Rb1組肥胖小鼠脂肪細胞直徑明顯小于HFD+GW9662+Rb1組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。7.HFD+Rb1組肥胖小鼠脂肪總蛋白中AQP7、PPARγ、p-PPARγ蛋白表達水平明顯高于對照組(P0.05)以及HFD+GW9662+Rb1組(P0.01),差異有統(tǒng)計學意義。HFD+DMSO+Rb1組中上述蛋白表達水平均高于HFD+GW9662+Rb1組,但四組肥胖小鼠脂肪蛋白中p-PPARγ(ser112)/PPARγ水平未見明顯差異。8.體外實驗中,經不同濃度刺激分化成熟3T3-L1細胞,篩選出最適Rb1作用濃度為40umol/L。9.體外實驗中,人參皂苷Rb1處理組以及DMSO+Rb1處理組的分化成熟3T3-L1細胞中脂滴大小明顯較對照組以及GW9662+Rb1組小,且Rb1組與DMSO+Rb1組培養(yǎng)基中游離三酯甘油水平較其他兩組高。10.與對照組相比,人參皂苷Rb1處理組促進分化成熟3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素的分泌(P0.05),抑制瘦素的分泌(P0.01),差異有統(tǒng)計學意義。11.體外實驗中,人參皂苷Rb1處理組的分化成熟3T3-L1脂肪細胞蛋白中AQP7、PPARγ、p-PPARγ表達水平明顯較對照組高,且DMSO+Rb1組上述蛋白表達水平高于GW9662+Rb1組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),但四個組p-PPARγ(ser112)/PARγ表達水平未見明顯統(tǒng)計學差異。結論1.人參皂苷Rb1明顯減輕肥胖小鼠的體質量、降低體脂重量,減小脂肪細胞大小,降低肥胖小鼠血清中游離脂肪酸水平,且有保護肥胖小鼠肝功能的作用;2.人參皂苷Rb1促進分化成熟3T3-L1脂肪細胞內三酯甘油的排出,改善分化成熟3T3-L1脂肪細胞內分泌功能,促進脂聯(lián)素分泌,減少瘦素分泌;3.人參皂苷Rb1通過PPARγ影響AQP7表達,最終發(fā)揮調節(jié)脂質轉運的作用。
【學位單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1 人參皂苷 Rb1 減輕肥胖小鼠體質量。A 實驗動物處理時間軸；B 每周小鼠體質量變化。*P<0.05 vs Chow，**P<0.01 vs Chow，#P<0.05 vs HFD+Rb12.人參皂苷 Rb1 對肥胖小鼠脂肪組織中 AQP7、PPARγ 表達的作用觀察到人參皂苷 Rb1 能夠改善小鼠的肥胖狀態(tài)，為了檢測 Rb1 是否影響三酯甘油的運輸?shù)鞍祝覀儥z測高脂飲食小鼠脂肪組織中 AQP7 以及 PPARγ的表達量，與高脂對照組(Control)相比,高脂+Rb1 組的 AQP7 以及 PPARγ 表達量明顯增加。

37圖 3 人參皂苷 Rb1 能減輕肥胖小鼠體質量，且此作用與 PPARγ 途徑密切相關。A 為四個肥胖小鼠大體圖；B 為藥物處理后肥胖小鼠體質量變化，藥物處理起始時間為圖 3B 箭頭所指時間。*P<0.05 vs HFD+Rb1，#P<0.05(HFD+Rb1 vs HFD+GW9662+Rb1)4.人參皂苷 Rb1 對肥胖小鼠體脂率的影響肥胖是一定程度的體質量過重和脂肪層過厚的一種狀態(tài)，除了體質量外，全身脂肪的含量的多少來衡量肥胖更為直接，即為體脂量。而體脂率=體脂/體質量，反映了脂肪占據(jù)體質量的百分比，是反應肥胖的一個重要參數(shù)，比體

質量更能體現(xiàn)肥胖中脂肪的含量且更符合肥胖的定義。所以我們檢測了脂肪組織的重量，并計算體脂率，圖 4A 為四組小鼠兩側皮下脂肪大體圖，圖中可見高脂喂養(yǎng)小鼠中 Rb1 組與 DMSO+Rb1 組肥胖小鼠附睪脂肪明顯較其他兩組小，圖 4B 結果顯示：與對照組(Control)相比，高脂+Rb1 組(Rb1)體脂率明顯降低；與 Rb1 組相比較，高脂+GW9662+Rb1 組(GW9662+Rb1)體脂率明顯增加 ， 及 Rb1 減 少 體 脂 率 的 作 用 部 分 被 GW9662 逆 轉 ； 而 高 脂+DMSO+Rb1(DMSO+Rb1)組對比高脂+GW9662+Rb1 組(GW9662+Rb1)的體脂率也是明顯降低的，及 DMSO 溶劑不影響脂肪組織重量；且 Rb1+GW9662組比較 Control 組以及 Rb1 組比較 Rb1+DMSO 組的體脂率都未見明顯差異，排除了 DMSO 溶劑對脂肪組織重量的影響。
【參考文獻】

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本文編號：2836528