發(fā)布時間：2020-10-10 04:18

　　 目的:本研究通過建立Hep G2人肝癌細胞株和C2C12小鼠成肌細胞株IR模型,觀察PIP對AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)信號通路激活后肝細胞中糖異生關(guān)鍵因子TORC2(環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)輔激活物2)、肌細胞中GLUT4(葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4)以及兩種細胞中PGC-1α(過氧化物酶體增殖物活化受體γ協(xié)同刺激因子1α)的干預(yù)作用。探索PIP改善糖代謝紊亂作用及可能的分子藥理學(xué)機制。方法:1.觀察PIP對Hep G2人肝癌細胞IR模型糖代謝紊亂相關(guān)因子的m RNA和蛋白的干預(yù)作用:用終濃度為1μM的DEX誘導(dǎo)HepG2人肝癌細胞建立IR模型,將其分為:IR模型組、陽性藥組(ROG組和Met組)、PIP組。給藥干預(yù)后分別檢測相應(yīng)時間段各組的葡萄糖消耗量并收集細胞,檢測目的因子:AMPKα、TORC2、PGC-1α蛋白及m RNA的表達。2.觀察PIP對C2C12小鼠成肌細胞IR模型糖代謝紊亂相關(guān)因子的m RNA和蛋白干預(yù)作用:C2C12小鼠成肌細胞在六孔板中長至70%-80%時,換用含2%馬血清的培養(yǎng)液代替完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)7-10天,成肌細胞即分化為肌小管細胞。采用終濃度為0.5m M的PA誘導(dǎo)分化好的肌小管細胞建立IR模型,將其分為:IR模型組、陽性藥組(ROG組和Met組)、PIP組。給藥干預(yù)后分別檢測相應(yīng)時間段各組的葡萄糖消耗量并收集細胞,檢測目的因子:AMPKα、PGC-1α、GLUT4蛋白及m RNA表達。結(jié)果:1.1μM的DEX作用于Hep G2人肝癌細胞48h后成功建立IR模型,用陽性藥(ROG、Met)和PIP干預(yù)后,IR模型細胞葡萄糖消耗量顯著增加。2.0.5m M的PA作用于C2C12肌小管細胞16h后成功建立IR模型,用陽性藥(ROG、Met)和PIP干預(yù)后,IR模型細胞葡萄糖消耗量顯著增加。3.五個濃度PIP分別干預(yù)IR模型HepG2細胞后,顯示上調(diào)AMPKα的m RNA和蛋白表達,抑制TORC2、PGC-1α的m RNA和蛋白表達。4.對比五個濃度PIP對HepG2細胞作用后五個時間點的葡萄糖消耗量,及各對應(yīng)因子的m RNA表達和蛋白表達,顯示的時效和量效結(jié)果是10μM,24h時PIP各項指標(biāo)作用最顯著。5.五個濃度PIP分別干預(yù)IR模型C2C12細胞后,顯示上調(diào)AMPKα、PGC-1α、GLUT4 m RNA表達;其蛋白表達也相應(yīng)增加。6.對比五個濃度PIP對C2C12細胞作用后五個時間點的葡萄糖消耗量,及各對應(yīng)因子的m RNA表達和蛋白表達,顯示的時效和量效結(jié)果是36h 10μM對GLUT4蛋白表達促進明顯,36h 5μM對PGC-1α蛋白表達促進明顯。結(jié)論:1.PIP通過上調(diào)細胞p-AMPKα的表達激活A(yù)MPK信號通路,增加Hep G2細胞、C2C12細胞IR模型上清中葡萄糖的消耗量而改善糖代謝紊亂。2.激活A(yù)MPK信號通路后,可抑制HepG2細胞中TORC2、PGC-1α的表達,減少糖異生。上調(diào)C2C12細胞中PGC-1α、GLUT4的表達,增加糖轉(zhuǎn)運。這些因子都是與IR的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的,這可能是PIP改善IR的部分作用機理。
【學(xué)位單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號與說明
引言
一、PIP對HepG2細胞IR模型糖代謝AMPK信號通路下游靶點的干預(yù)研究
    第一章 HepG2細胞培養(yǎng)及IR模型的建立
        1.實驗材料
        2.實驗方法
        3.實驗結(jié)果
        4.統(tǒng)計學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第二章 PIP對HepG2細胞IR模型糖代謝紊亂的改善作用
        1.實驗材料
        2.實驗方法
        3.實驗結(jié)果
        4.統(tǒng)計學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第三章 PIP對HepG2細胞IR模型AMPKα、TORC2、PGC-1α mRNA的影響
        1.實驗材料
        2.實驗方法
        3.實驗結(jié)果
        4.統(tǒng)計學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第四章 PIP對HepG2細胞IR模型AMPKα、p-AMPK、TORC2、PGC-1α蛋白表達的影響
        1.實驗材料
        2.實驗方法
        3.實驗結(jié)果
        4.統(tǒng)計學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
二、PIP對C2C12細胞IR模型糖代謝AMPK信號通路下游靶點的干預(yù)研究
    第一章 C2C12細胞培養(yǎng)及IR模型的建立
        1.實驗材料
        2.實驗方法
        3.實驗結(jié)果
        4.統(tǒng)計學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第二章 PIP對C2C12細胞IR模型糖代謝紊亂的改善作用
        1.實驗材料
        2.實驗方法
        3.實驗結(jié)果
        4.統(tǒng)計學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第三章 PIP對C2C12細胞IR模型PGC-1α、GLUT4 mRNA的影響
        1.實驗材料
        2.實驗方法
        3.結(jié)果及結(jié)論
        4.統(tǒng)計學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第四章 PIP對C2C12細胞IR模型AMPKα、p-AMPK、PGC-1α、GLUT4蛋白表達的影響
        1.實驗材料
        2.實驗方法
        3.實驗結(jié)果
        4.統(tǒng)計學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
討論
結(jié)論與展望
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章
致謝

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高彩暇;丁樹哲;劉圣廣;許其衛(wèi);;應(yīng)激和運動條件下AMPK在組織中的調(diào)節(jié)[J];中國運動醫(yī)學(xué)雜志;2006年01期

2 李娟娟;凌文華;;AMPK與肥胖[J];國際內(nèi)科學(xué)雜志;2007年11期

3 劉文倩;艾華;;AMPK與肥胖和減肥關(guān)系研究進展[J];中國運動醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

4 蔡明春,黃慶愿,高鈺琪;AMPK與能量代謝[J];重慶醫(yī)學(xué);2005年01期

5 葛斌;謝梅林;顧振綸;周文軒;郭次儀;;AMPK作為治療2型糖尿病新靶點的研究進展[J];中國藥理學(xué)通報;2008年05期

6 徐靜;劉毅;完強;賈振華;王榮;;高糖環(huán)境對大鼠腎小球系膜細胞AMPK表達及活性的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年05期

7 宮克城;丁樹哲;;AMPK與2型糖尿病的關(guān)系及其在運動介導(dǎo)下的研究[J];遼寧體育科技;2009年03期

8 羅招凡;李芳萍;丁鶴林;程樺;;AMPKα2基因克隆及其野生型和突變型真核表達載體的構(gòu)建[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年28期

9 丁曉潔;王佑民;王麗萍;;高脂飲食對大鼠肝臟組織AMPK表達及其活性的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年06期

10 程媛;王佑民;丁曉潔;;肥胖大鼠骨骼肌AMPK表達及其與糖脂代謝的關(guān)系[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 ;Co-commitment and Interplay between Akt and AMPK in the Regulation of Endothelial NO Synthase Phosphorylation by Reactive Oxygen Species[A];第九屆全國心血管藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

2 Paul M Vanhoutte;;SIRT1 and AMPK:the Seesaw Effect in Regulating Endothelial Sene-scence[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文集[C];2011年

3 李瑾;朱海波;;新結(jié)構(gòu)類型調(diào)血脂化合物與靶蛋白AMPK分子間相互作用初步解析[A];全國第十二屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

4 宋海燕;李強;孫玉倩;張巾超;鄔艷慧;;AMPK結(jié)合蛋白的篩選及其與2型糖尿病的關(guān)系研究[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

5 ;AMPK mediated an apoptotic response to combined effect of hypoxia stress and ER stress[A];2012全國發(fā)育生物學(xué)大會摘要集[C];2012年

6 ZHANG Jian-wei;MA Xiao-wei;DENG Rui-fen;DING Shan;GU Nan;GUO Xiao-hui;;Genetic variability in AMPKαl gene may have synergetic effect with smoking on risk of coronary artery disease in chinese type 2 diabetics[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

7 姚遠;周京軍;裴建明;;AMPK介導(dǎo)無鈣預(yù)處理心肌保護作用[A];中國生理學(xué)會第九屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2011年

8 季樂樂;Haifeng Zhang;Feng Gao;;A novel mechanism of preconditioning:Attenuating reperfusion injury through enhanced myocardial glucose uptake via insulin-stimulated Akt and AMPK activation[A];中國生理學(xué)會第十屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2013年

9 WU Qiao;;The orphan nuclear receptor Nur77 regulates AMPK activity through LKB1 subcellular localization in glucose metabolism[A];細胞—生命的基礎(chǔ)——中國細胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

10 Jia-Wei Wu;;Conserved elements in allosteric regulation of AMPK[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十一次會員代表大會暨2014年全國學(xué)術(shù)會議論文集——專題報告二[C];2014年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 黃敏;精力充沛基因決定?[N];新華每日電訊;2011年

2 實習(xí)生 程鳳;不愛鍛煉可能與基因缺失有關(guān)[N];科技日報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 陳雷;AMP激活的蛋白質(zhì)激酶（AMPK）調(diào)控機制的研究[D];清華大學(xué);2010年

2 張秀娟;TSH調(diào)節(jié)肝臟HMG-CoA還原酶磷酸化修飾的研究[D];山東大學(xué);2014年

3 趙順玉;消積飲聯(lián)合CIK通過AMPKα/Sp1/EZH2/DNMT1相關(guān)通路抗肺癌生長的作用機制[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 王紅亮;AMPK-α在鹵蟲胚胎發(fā)育過程中對細胞有絲分裂調(diào)控的研究[D];浙江大學(xué);2015年

5 周錫紅;三甲基甘氨酸通過AMPK途徑影響脂肪沉積的研究[D];浙江大學(xué);2015年

6 劉效磊;AMPK/mTOR介導(dǎo)有氧運動提高骨骼肌胰島素敏感性的機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

7 劉書東;AICAR誘導(dǎo)激活的AMPK在肝臟抑制TSH/SREBP-2/HMGCR通路[D];山東大學(xué);2015年

8 李知行;電針對胰島素抵抗模型大鼠肝臟AMPK、ACC的干預(yù)機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 尉娜;AMPK通過mTOR促進腦缺氧條件下血管內(nèi)皮細胞作用的研究[D];鄭州大學(xué);2016年

10 呂瓊;AMPK在炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積中的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 柯志強;AMPK信號通路在白藜蘆醇改善高糖誘導(dǎo)乳鼠心肌細胞損傷中的作用[D];湖北科技學(xué)院;2015年

2 肖瑤;AMPK對低氧誘導(dǎo)血管生成作用的研究[D];湖北科技學(xué)院;2015年

3 王玉兵;HIF-1α、AMPK、E-cadherin在前列腺癌組織中的表達及意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 魏蘇玉;乙醇對H4-ⅡE細胞脂質(zhì)代謝及AMPK表達的影響[D];延邊大學(xué);2015年

5 陳婷;肌肉特異敲除AMPKα2對小鼠脂代謝的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 張二東;銅離子及模擬太空環(huán)境通過ROS/AMPK信號誘導(dǎo)人B淋巴母細胞凋亡[D];蘭州大學(xué);2015年

7 徐英秀;硫化氫通過AMPK激活調(diào)控腦缺血后小膠質(zhì)細胞的極化狀態(tài)[D];蘇州大學(xué);2015年

8 黃艷;AMPK和SIRT-1參與定時高脂飲食對小鼠肝臟生物鐘基因的影響研究[D];蘇州大學(xué);2015年

9 楊霞;AMPK參與線粒體通路介導(dǎo)的氟致H9c2心肌細胞凋亡機制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

10 閆旭紅;胰島素對1型糖尿病大鼠睪丸脂聯(lián)素及其受體、AMPK、AKT和eNOS表達的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：2834713