視黃醇X受體(RXRα)作為核受體家族的成員之一,參與了細(xì)胞增殖、分化、代謝和胚胎發(fā)育等重要生理學(xué)環(huán)節(jié)的調(diào)控,是治療代謝性疾病和癌癥等的重要靶點(diǎn)。黃連素(berberine,Ber),又名小檗堿,是一種從黃連、黃柏等藥用植物中提取出的異喹啉生物堿,臨床上主要用于胃腸炎和細(xì)菌性痢疾等的治療。近年來很多藥理學(xué)和臨床研究中還發(fā)現(xiàn)黃連素具有抗癌的功效,引起了廣泛關(guān)注,但其發(fā)揮抗癌作用的靶標(biāo)并不清楚。本課題組的前期研究表明,黃連素能夠作為一種新型的激動(dòng)劑靶向RXRα,通過調(diào)控RXRα的轉(zhuǎn)錄激活活性以及降解核內(nèi)的β-catenin,抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖。我們通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),黃連素可以和RXRα的天然配體9-順式視黃酸(9-cis-RA,9cRA),在RXRα的轉(zhuǎn)錄激活水平及結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的抑制等方面發(fā)揮協(xié)同的作用。Real-time PCR實(shí)驗(yàn)表明,黃連素和9-cis-RA能在提高RXRα的下游靶基因腫瘤抑制因子FOX03A的mRNA水平表達(dá)上發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)。這些協(xié)同作用暗示了黃連素是通過不同于9-cis-RA的獨(dú)特的方式結(jié)合到RXRα配體結(jié)合區(qū)域來發(fā)揮功效。哺乳動(dòng)物單雜交和HPLC等實(shí)驗(yàn)的點(diǎn)突變分析,證明黃連素通過直接與核受體RXRα上275位的谷氨酰胺、316位的精氨酸殘基結(jié)合,增強(qiáng)RXRα的轉(zhuǎn)錄激活水平。哺乳雙雜交實(shí)驗(yàn)證明黃連素可以促進(jìn)RXRα和β-cαtenin的相互作用,并且呈濃度依賴性。而黃連素對(duì)RXRα的靶定,對(duì)促進(jìn)RXRα和β-cαtenin的結(jié)合,抑制Wnt通路活性和腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)都具有重要意義。黃連素能顯著激活RXRα的轉(zhuǎn)錄活性,并通過靶向RXRα抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖,這都為我們?cè)O(shè)計(jì)以RXRα為靶點(diǎn)的抗癌藥物提供了依據(jù)。通過黃連素和RXRα的結(jié)合模式等方面的分析,我們期待設(shè)計(jì)出以黃連素為基礎(chǔ),不僅保留其本身低毒性、高選擇性的優(yōu)點(diǎn),并且溶解度和抗腫瘤特性都更好的化合物。我們?cè)O(shè)計(jì)并合成出21種黃連素的衍生物,通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)和MTT實(shí)驗(yàn),檢測(cè)這些類似物在對(duì)RXRα轉(zhuǎn)錄激活活性、RXRα和β-cαtenin結(jié)合及人結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制方面的生物學(xué)特性。同時(shí),采用“改造-評(píng)價(jià)-再改造-再評(píng)價(jià)”的循環(huán)模式,對(duì)高通量篩選后的類似物進(jìn)行初步構(gòu)效分析,并將這些不同衍生物間的功能學(xué)差異及官能團(tuán)改變,反饋到下一代改造。至此,我們已經(jīng)挑選出了兩個(gè),與黃連素相比溶解性更好以及對(duì)RXRα轉(zhuǎn)錄激活能力更強(qiáng)和抗癌效果更顯著的黃連素衍生物Ber-122、Ber-125,為后續(xù)的藥物分析及下一步的深入改造打下了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

第一章前言逡逑種季銨型異哇啉類生物堿１３７］，作為藥物已有上百年的應(yīng)用歷史。我國(guó)擁有非常豐逡逑富的黃連素資源，廣泛分布于中國(guó)各地。下圖１．２展示了植物黃連及其主要成分的逡逑化學(xué)結(jié)構(gòu)式。逡逑0」逡逑圖１．２植物黃連及黃連素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式逡逑Ｆｉｇ．邋１．２邋Ｔｈｅ邋Ｃｏｐｔｉｃ邋ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｃｈｅｍｉｃａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ逡逑黃連素作為抗菌藥在臨床上使用多年，可以治療消化道潰瘍、慢性膽囊炎、逡逑高血壓、心律失常、糖尿病等疾病，療效確切；具有廣譜性的抗菌效果，可以抑逡逑制或消滅包括Ｇ＋菌、Ｇ？菌、真菌、霉菌、病毒、原蟲、線蟲等在內(nèi)的微生物病逡逑原體。黃連素還是一種常見的抗感染藥，不僅對(duì)腸道感染、眼結(jié)膜炎、中耳炎有逡逑療效，還能抑制肺炎雙球菌、傷寒桿菌和阿米巴原蟲等的活動(dòng)。逡逑在近年來的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察中，我們發(fā)現(xiàn)黃連素還兼具抗癌的作用。越逡逑來越多的文獻(xiàn)研究顯示，黃連素能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，逡逑包括結(jié)腸癌［３３＿３４－３８］。再加上黃連素本身的低毒優(yōu)勢(shì)，讓它的抗癌活性得到了更多逡逑關(guān)注

敲除；或是從天然產(chǎn)物出發(fā)，通過半合成的策略改變黃連素的一些局部官能團(tuán)。逡逑黃連素經(jīng)過初步結(jié)構(gòu)改造后，利用實(shí)驗(yàn)檢測(cè)并確定靶向受體ＲＸＲａ的先導(dǎo)化合逡逑物，再通過綜合分析指導(dǎo)下一輪改造，大體流程如下圖１．３所示。這種“改造－逡逑評(píng)價(jià)－再改造－再評(píng)價(jià)”的循環(huán)模式，將藥物改造與功能檢測(cè)之間進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，逡逑并將這些結(jié)果有效地反饋給后續(xù)改造及系統(tǒng)性驗(yàn)證。逡逑１５逡逑

式共同處理細(xì)胞Ｉ５ｈ后，提取細(xì)胞中的總ＲＮＡ，反轉(zhuǎn)錄后利用ＲＴ－ＰＣＲ分析Ｆ０Ｘ０３Ａ基逡逑因ｍＲＮＡ的表達(dá)水平。每組數(shù)據(jù)以Ｍｅａｎ邋±ＳＥＭ表示。逡逑如上圖３．２所示，隨著黃連素濃度的升高，ＲＸＲａ的靶基因Ｆ０Ｘ０３Ａ的逡逑ｍＲＮＡ表達(dá)水平升高；添加９－ｃｉｓ－ＲＡ與不同濃度的黃連素共同處理ＫＭ１２Ｃ細(xì)逡逑胞后，實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到腫瘤抑制因子Ｆ０Ｘ０３Ａ的ｍＲＮＡ表達(dá)水平得逡逑到了一定程度的提升，這些也反映出了黃連素與９－ｃｉｓ－ＲＡ的協(xié)同效應(yīng)。逡逑３．１．１．３黃連素和９－順式視黃酸對(duì)結(jié)腸癌的抑制具有協(xié)同作用逡逑如下圖３．３所示，黃連素處理細(xì)胞３６ｈ后，隨著濃度的升高，對(duì)結(jié)腸癌細(xì)逡逑胞的抑制作用增強(qiáng)，并且，這種作用是呈濃度依賴的。聯(lián)合９－ｃｉｓ－ＲＡ處理后，逡逑它們對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用也變得更強(qiáng)，說明，黃連素和９－ｄｓ－ＲＡ在對(duì)結(jié)腸逡逑癌細(xì)胞的抑制能力方面具有協(xié)同作用。逡逑４４逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2817529