【摘要】：目的:通過實驗研究,闡明朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響及作用機制。方法:第一部分:朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響1.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響條件性恐懼模型的復制:將實驗動物隨機分為空白對照組、模型對照組、給藥組,每組10只。給藥組實驗動物給予朱砂安神丸混懸液(經灌胃途徑給予,0.81mg/g),空白對照組、模型對照組均給予相同體積的雙蒸水,1次/日,連續(xù)7日。在末次給藥后,將模型對照組、給藥組實驗動物依次放入條件性恐懼刺激箱內,適應120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號(2000Hz,75dB)。第125秒,在聲音信號的基礎上給予實驗動物持續(xù)5秒的不可逃避的足底電刺激(0.75mA)。第130秒聲音信號與電刺激同時結束,130～190秒內不做任何處理。第190秒重復120～190秒過程,連續(xù)20次�？瞻讓φ战M僅給予聲音信號不給予電刺激,其他操作相同。結束后讓實驗動物在刺激箱內停留120秒后再放回飼養(yǎng)籠�？謶钟洃浟暤脺y試:復制條件性恐懼模型的次日,將各組實驗動物依次再放入刺激箱內,適應120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號(2000Hz,75dB)。第130秒聲音信號結束,130～190秒內不做任何處理,記錄聲音信號停止后60秒內實驗動物的僵直反應時間。第190秒重復120～190秒過程,連續(xù)5次。結束后讓實驗動物在刺激箱內停留120秒后再放回飼養(yǎng)籠。記錄各組實驗動物的僵直反應時間,以此作為觀測指標探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響。2.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行條件性恐懼模型的復制,在習得測試后的第1、3、5、7天,將各組實驗動物依次再放入刺激箱內,重復恐懼記憶習得測試的操作,記錄各組實驗動物的僵直反應時間,以此作為觀測指標探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響。3.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行條件性恐懼模型的復制,在各組實驗動物進行條件性恐懼模型復制的次日,將各組實驗動物放入大小鼠開場活動實驗箱內,記錄各組實驗動物運動時間、運動距離,以此探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響。第二部分朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬突觸可塑性的影響1.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬突觸功能可塑性的影響按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行條件性恐懼模型的復制,在各組實驗動物進行條件性恐懼模型復制的次日,用烏拉坦腹腔注射麻醉各組實驗動物,在腦立體定位儀上固定后,埋置自制的刺激電極和記錄電極。記錄基礎水平的群峰電位后,高頻強直刺激(HFS)誘導長時程增強(LTP)。記錄各組實驗動物海馬區(qū)群峰電位(PS),根據(jù)PS的變化率探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬功能可塑性的影響。2.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬突觸結構可塑性的影響按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行條件性恐懼模型的復制,在各組實驗動物進行條件性恐懼模型復制的次日,各組隨機選取3只實驗動物,水合氯醛腹腔注射麻醉后,取出海馬組織,制作透射電鏡超薄切片,在日立(H-7650)透射電鏡下放大30000倍觀察神經氈周圍的突觸形態(tài)。使用Image-Pro Plus6.0測量海馬CA1神經元突觸活性區(qū)長度、突觸PSD厚度、突觸間隙寬度,以此探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬結構可塑性的影響。3.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬神經元的保護作用按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行條件性恐懼模型的復制,在各組實驗動物進行條件性恐懼模型復制的次日,各組隨機選取3只實驗動物,水合氯醛腹腔注射麻醉后,取出海馬組織,制作透射電鏡超薄切片,在日立(H-7650)透射電鏡下放大8000倍觀察海馬CA1區(qū)神經元形態(tài),放大15000倍觀察神經元內細胞器形態(tài)。結果:第一部分:朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響1.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響實驗結果表明:在條件性恐懼記憶習得階段的第1min、第3min、第5min時間點以及第2min、第4min時間點,模型對照組實驗動物的僵直反應時間高于空白對照組,兩者比較具有顯著差異(P0.01,P0.05);與模型對照組比較,給藥組實驗動物的僵直反應時間均低于模型對照組,但兩者比較無顯著差異。2.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響實驗結果表明:在條件性恐懼記憶消退階段,各組實驗動物的僵直反應時間隨著時間的延長逐漸減少;與空白對照組比較,模型對照組實驗動物的僵直反應時間在各時間段內均明顯高于空白對照組,兩者比較具有極顯著差異(P0.01);與模型對照組比較,給藥組實驗動物的僵直反應時間均低于模型對照組,其中,第5日給藥組實驗動物的僵直反應時間低于模型對照組,兩者比較具有顯著差異(P0.05),第7日給藥組實驗動物的僵直反應時間明顯低于模型對照組,兩者比較具有極顯著差異(P0.01)。3.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響實驗結果表明:與空白對照組比較,模型對照組實驗動物的運動時間、運動距離均小于空白對照組,但兩者比較無顯著差異;與模型對照組比較,給藥組實驗動物的運動時間、運動距離均大于模型對照組,但兩者比較無顯著差異。第二部分:朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬神經元突觸可塑性的影響1.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬功能可塑性的影響實驗結果表明:高頻強直刺激后,實驗動物的PS幅值增加的百分率超過了20%,說明LTP誘發(fā)成功。與空白對照組比較,模型對照組的PS幅值在第40min、70min、80min、90min、100min時明顯增大,兩者比較具有顯著差異(P0.05);與模型對照組比較,給藥組的PS幅值在120min的測定過程中均顯著減少,兩者比較具有顯著差異(P0.05)。2.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬結構可塑性的影響實驗結果表明:比較各組實驗動物海馬CA1區(qū)神經元突觸的數(shù)目及形態(tài),與空白對照組比較,模型對照組實驗動物海馬神經元神經氈內出現(xiàn)大量空泡,突觸數(shù)目明顯減少,突觸前膜、突觸后膜的邊緣界限不清晰,突觸間隙內模糊不清,突觸前膜內的突觸小泡明顯減少甚至消失,突觸前膜內線粒體腫脹,內部結構溶解,嵴減少甚至消失。與模型對照組比較,給藥組神經氈內未出現(xiàn)空泡,突觸數(shù)目較多,突觸各部分結構界限清晰,突觸前膜內的突觸小泡也較多,圓而清亮,分布較為密集,突觸前、后膜,與空白對照組接近,突觸前膜內線粒體結構輕微腫脹,但嵴較多,清晰可見。測量各組實驗動物海馬CA1區(qū)神經元突觸活性區(qū)長度、突觸PSD厚度、突觸間隙寬度:模型對照組實驗動物的突觸活性區(qū)長度(212.65±48.63nm)明顯小于空白對照組(247.14±27.57nm),兩者比較具有極顯著差異(P0.01),突觸PSD厚度(37.98±7.84nm)明顯小于空白對照組(51.20±9.48nm),兩者比較具有極顯著差異(P0.01),突觸間隙寬度(31.73±5.20nm)明顯大于空白對照組(22.06±2.80nm),兩者比較具有極顯著差異(P0.01);給藥組實驗動物海馬CA1區(qū)突觸活性區(qū)長度(238.73±19.20nm)大于模型對照組,兩者比較具有顯著差異(P0.05),突觸PSD厚度(51.54±6.87nm)明顯大于模型對照組,兩者比較具有極顯著差異(P0.01),突觸間隙寬度(21.90±2.71nm)明顯小于模型對照組,兩者比較具有極顯著差異(P0.01)。3.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬神經元的保護作用實驗結果表明:比較各組實驗動物海馬CA1區(qū)神經元的形態(tài),空白對照組實驗動物的海馬神經元細胞結構完整,細胞膜、核膜清晰,細胞漿內細胞器散在分布,且結構完好;模型對照組實驗動物的海馬神經元細胞結構完整,但出現(xiàn)細胞膜、核膜不清晰,細胞核皺縮等現(xiàn)象,細胞漿內出現(xiàn)空泡,粗面內質網部分出現(xiàn)明顯的擴張,線粒體大多出現(xiàn)腫脹、嵴減少或消失的現(xiàn)象,甚至小部分線粒體發(fā)生溶解,內部出現(xiàn)空泡,部分神經元細胞胞漿內可見溶酶體;給藥組實驗動物的海馬神經元細胞結構完整、清晰,細胞核大,細胞膜、核膜均完整,細胞漿內細胞器較多,形態(tài)較好,細胞漿內空泡、細胞器變形現(xiàn)象比模型對照組減少,粗面內質網擴張現(xiàn)象不明顯,線粒體大多形態(tài)完好、嵴較多、清晰可見,小部分線粒體略有腫脹,嵴減少。結論:1.朱砂安神丸具有促進恐懼記憶消退的作用。2.朱砂安神丸能夠促進恐懼記憶消退的作用與其保護海馬神經元,增強海馬突觸結構與功能可塑性相關。
【學位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

憶的編碼和鞏固的過程；前扣帶回、內側前額葉是能夠調節(jié)恐懼情緒的調節(jié)中樞；逡逑在條件性恐懼消退中發(fā)揮著重要作用的則是海馬和內側前額葉Ｗ。恐懼情緒的基逡逑本神經環(huán)路如圖１所示。逡逑１７逡逑

實驗數(shù)據(jù)用３Ｆ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１７．０進行統(tǒng)計分析，兩組間比較采用獨立逡逑樣本／檢驗，Ｐ＜０．０５表示具有顯著差異，Ｐ＜０．０１表示具有極顯著差異。實驗結果逡逑見表２，圖２。逡逑表２條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得階段的僵直反應時間（ｆ±ｓ，ｎ＝１０）逡逑僵直反應時間（ｓ）逡逑組別逡逑邐Ｍｉｎｉ邐Ｍｉｎ２邐Ｍｉｎ３邐Ｍｉｎ４邐Ｍｉｎ５逡逑空白對照組邋〗．３７±０＿４１邐１．４７±０．５０邐１＿５８±０＿２７邐１．６０±0．４４邐１．２５±０．３１逡逑模型對照組邐５５．９７±５．２１＊＊邐５５．６３±９．７３＊邐５７．３７±３．７０＊＊邐５７．６１±１．９６＊邐５５．５６±４．６７＊＊逡逑給藥組邋５４．７３±５．９３邐５４．３８±８．３０邐５０．２２±８．２２邐４９．１１±５．１２邐４８．８４±５．４１逡逑注：與空白對照組比較

實驗數(shù)據(jù)用３ｆ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１７．０進行統(tǒng)計分析，兩組間比較采用獨立逡逑樣本／檢驗，Ｐ＜０．０５表示具有顯著差異，Ｐ＜０．０１表示具有極顯著差異。實驗結果逡逑見表３，圖３。逡逑表３條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退階段的僵直反應時間（３ｆ±ｓ，ｎ＝１０）逡逑僵直反應時間（ｓ）逡逑組別逡逑Ｄａｙｌ邐Ｄａｙ３邐Ｄａｙ邋５邐Ｄａｙ邋７逡逑空白對照組邐４．０８±０．９２邐４．２８±１．４２邐２．９８±０．６８邐２．２１±０．７７逡逑模型對照組邐４６．７４土邋１２．６６＊＊邐４２．５７±１３．６６＊＊邐３１．８６土邋１０．０９＊＊邐２７．３５ｉ８．７４＊＊逡逑給藥組邐４２．２２±１２．５９邐３２．７８±１０．０５邐１７．６６±５．７８Ａ邐６．２２±１．９２ＡＡ逡逑注：１）與空白對照組比較，＊Ｐ＜0．0５，邋＊＊Ｐ＜０．０１；逡逑２）與模型對照組比較，ＡＰ＜０．０５，＾ＦＯ．Ｏｌ。逡逑６０逡逑＊＊逡逑５０邐＊＊逡逑＾邐Ｈｈ逡逑ｕｉ邋４0邐１邐．？上．逡逑一邋ｗ邐＊＊逡逑畫邐：：：：：—Ｌ邐ｔ邐＊＊逡逑＾邋３０邐｜邋N邐｜：丨：逡逑ｍ邐ｒ－＾ｈ逡逑必邐：：：：Ａ逡逑R*２０逡逑８３邐：？：？：邐？；？；？邋ｒ＾－ｉ逡逑ｉｏ邐產逡逑0邋Ｉ邐灥丨：：：：ｌｌ邐W邐W丨畫邐＿逡逑Ｄａｙｌ邐ＤａｙＢ邐Ｄａｙ５邐Ｄａｙ７逡逑ｓ空白對照組□模型對照組□給藥組逡逑圖３條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退階段的僵直反應時間逡逑實驗結果表明：在條件性恐懼記憶消退階段，各組實驗動物的僵直反應時間逡逑均逐漸減少；與空白對照組比較

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8 陳U喫

本文編號：2810000