目的:巴天酸模屬于蓼科酸模屬植物,為土大黃的藥物來(lái)源之一。主產(chǎn)于我國(guó)東北、華北及西北各省,其藥用部位為根部,性味苦酸寒,有清熱解毒、活血止血、通便殺蟲的功效。建立離線二維反相/反相色譜體系,對(duì)巴天酸模乙酸乙酯萃取部位中的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分離,并為巴天酸模中活性成分的篩選以及微量化合物標(biāo)準(zhǔn)品的制備提供快速分離的方法;基于目前化學(xué)成分及藥理作用的研究基礎(chǔ),本課題對(duì)該植物中的蒽醌類苷成分進(jìn)行提取富集,并對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行定性分析和色譜分離;對(duì)分離得到的組分進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選,得到活性較好的組分并進(jìn)行體外抗腫瘤活性測(cè)定,計(jì)算每個(gè)活性組分的IC_(50)值,評(píng)價(jià)并比較其抗腫瘤效果。方法:采用離線二維液相色譜技術(shù),使用新型反向材料環(huán)氧四氮唑色譜柱與Unitary C18色譜柱,對(duì)巴天酸模進(jìn)行分離、分析;通過(guò)系統(tǒng)溶劑萃取法,固相萃取技術(shù)和高壓制備液相色譜技術(shù),對(duì)巴天酸模中的蒽醌苷類成分進(jìn)行提取和高效率、高自動(dòng)化的分離;采用超高效液相/質(zhì)譜聯(lián)用(UHPLC-MS)技術(shù)對(duì)巴天酸模中的蒽醌苷類組分進(jìn)行定性分析,明確其中的化學(xué)成分;應(yīng)用CCK-8法對(duì)分離得到的組分進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選及分析;最終應(yīng)用UHPLC-MS技術(shù)對(duì)活性組分進(jìn)行分析,推測(cè)其主要成分。結(jié)果:建立了離線反相/反相二維液相色譜(2D-LC)分離方法;通過(guò)色譜分離得到31個(gè)蒽醌苷類組分;在UHPLC-MS定性分析中,明確了巴天酸模蒽醌苷類組分的19個(gè)化學(xué)成分;經(jīng)細(xì)胞活性篩選及分析后,得到4個(gè)有明確抗腫瘤活性的組分,即BTS-F1-19、BTS-F1-20、BTS-F1-21和BTS-F2-8。對(duì)這些活性組分進(jìn)行深入地抗腫瘤活性測(cè)定后,發(fā)現(xiàn)BTS-F1-19抗腫瘤效果穩(wěn)定,對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率均較好。結(jié)論:本文的結(jié)果為巴天酸模化學(xué)成分的分離分析,以及進(jìn)一步抗腫瘤機(jī)制的研究提供了可靠的依據(jù)。
【學(xué)位單位】：山西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

4 木脂素類 220 - 240 nm280 - 290 nm4 蒽醌類 240 - 260 nm 苯環(huán)結(jié)構(gòu)；262 - 295 nm 醌類結(jié)構(gòu)；305 - 389 nm 苯環(huán)結(jié)構(gòu)；> 400 nm C=O 結(jié)構(gòu)1 二苯乙烯苷類 320 nm.2 色譜柱的選擇及其保留特性的比較在前期研究中，制備了一種苯基與四唑基鍵合在二氧化硅上的環(huán)氧四氮唑料，與常規(guī) C18 材料具有不同的選擇性與保留特性。在此基礎(chǔ)上，本研究環(huán)氧四氮唑與 Unitary C18 材料裝填的色譜柱，對(duì)巴天酸模的乙酸乙酯提取析，結(jié)果見圖 2。

和 C18 鍵合色譜填料制作的不同色譜柱來(lái)構(gòu)建離線二維色譜分離體系。為了方便后續(xù)的制備，采用了甲醇和水（含 0.1%甲酸）作為流動(dòng)相優(yōu)化分離條件，流動(dòng)相體系簡(jiǎn)單，沒(méi)有鹽的引入，避免了脫鹽處理。圖 2a 色譜圖峰形簡(jiǎn)單，峰的重疊現(xiàn)象少，在上樣量較大的一維制備中峰之間重合的可能性低，因此，選用環(huán)氧四氮唑作為一維色譜分離材料。第二維色譜分析需要色譜柱具有更好的分離效果，而圖 2b 色譜圖峰間距小，峰多且雜，選擇 Unitary C18作為二維色譜的分析柱，能夠得到更多的樣品信息。2.3 巴天酸模乙酸乙酯萃取液的一維色譜分離在構(gòu)建反相/反相二維色譜系統(tǒng)中，選擇環(huán)氧四氮唑作為一維分離色譜柱。在上樣量大的情況下，一些含量低的成分峰在制備譜圖中比較明顯，因此，實(shí)際接取組分的數(shù)量與分析譜圖中峰的數(shù)量存在差異。按色譜峰接取流分，得到 18 個(gè)組分，分別為F1～F18(見圖 3)。

石油醚和氯仿萃取的成分相似；通過(guò)與混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖（圖6）的保留時(shí)間以及紫外吸收值對(duì)比，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)萃取部位的出峰情況與混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖相似，表明其包含的主要成分可能是常見的幾個(gè)游離蒽醌類成分。而正丁醇部位保留了巴天酸模提取液大部分的中等極性成分（見圖 5d），并且一部分復(fù)雜的峰在 400 nm以上也有紫外吸收，而這是蒽醌類成分的紫外吸收特征。水層中可能保留一些沒(méi)有紫外吸收的單糖和寡糖類成分，需要通過(guò)其他途徑進(jìn)一步分析（見圖 5e)。鑒于正丁醇層中涵蓋了乙醇提取液的大部分未知的蒽醌及蒽醌苷類組分，而且萃取的目標(biāo)物含量高，因此，選擇對(duì)正丁醇層進(jìn)行進(jìn)一步分離分析。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2808946