【摘要】：本論文以仙茅(Curculigo Orchioides Gaertn)為研究對(duì)象,對(duì)其多糖進(jìn)行提取、分離純化、一級(jí)結(jié)構(gòu)鑒定、高級(jí)結(jié)構(gòu)研究及體內(nèi)抗骨質(zhì)疏松活性的研究。首先采用熱水和堿水將仙茅中的水溶性多糖和堿溶性多糖分別進(jìn)行提取,水提多糖采用分級(jí)醇沉法,所得多糖和堿提醇沉多糖分別進(jìn)行Sevag法脫蛋白、透析和凍干處理得到四個(gè)不同部位的仙茅粗多糖CO50、CO70、CO90和COB。將溶解性較好、糖含量較高且體內(nèi)抗骨質(zhì)疏松活性最好的兩個(gè)部位CO70和CO90分別進(jìn)行DEAE-Cellulose 52陰離子交換柱層析分離,將分離所得主峰樣品用Sephadex G-75凝膠柱進(jìn)一步純化,得到三個(gè)多糖COP70-1、COP70-3和COP90-1。經(jīng)高效凝膠滲透色譜法驗(yàn)證COP70-1、COP70-3和COP90-1為均一多糖,分子量分別為100647 Da、53399 Da和4609 Da。紫外可見(jiàn)光譜掃描表明COP70-1、COP70-3和COP90-1中均不含有核酸和蛋白質(zhì)。采用完全酸水解-柱前PMP衍生化-HPLC分析和離子色譜分析其單糖組成,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比確定其單糖D/L絕對(duì)構(gòu)型、結(jié)合完全甲基化-GC-MS分析和核磁共振分析得到三種均一多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)特征,結(jié)果表明COP70-3是由7種單糖組成的復(fù)雜多糖,包括(1→5)連接α-L-Araf、(1,3→5)連接α-L-Araf、(1,2→5)連接α-L-Araf、末端α-L-Araf、(1→3)連接β-L-Rhap、(1→4)連接β-D-Manp、(1,3→6)連接β-D-Manp、(1→6)連接β-D-Galp、(1,3→6)連接β-D-Galp、(1→3)連接β-D-GalpA、(1→6)連接α-D-Glcp、(1→3)連接α-D-GalpA、末端α-D-GlcpA 13種連接殘基。COP70-1和COP90-1都是由葡萄糖和甘露糖兩種單糖組成,其中COP70-1由(1→4)連接3-O-acetyl-β-DManp、(1→4)連接β-D-Glcp、(1,3→6)連接β-D-Manp和α-D-Glcp組成,COP90-1由(1→4)連接β-D-Manp、(1→4)連接3-O-acetyl-β-D-Manp、(1→4)連接β-DGlcp、(1,3→6)連接β-D-Manp、末端β-D-Manp和α-D-Glcp組成。采用剛果紅實(shí)驗(yàn)、圓二色譜、掃描電鏡和原子力顯微鏡對(duì)均一多糖的高級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步研究,剛果紅實(shí)驗(yàn)和圓二色譜分析表明COP70-3和COP90-1中均不含有三股螺旋結(jié)構(gòu),掃描電鏡結(jié)果表明COP70-1為分布較為均勻的球形顆粒,COP70-3為分布不均的片狀結(jié)構(gòu),COP90-1為均勻的橢球形。這三個(gè)均一多糖均未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本論文采用去卵巢手術(shù)建立大鼠原發(fā)性骨質(zhì)疏松模型,考察仙茅多糖CO50、CO70、CO90和COB的抗骨質(zhì)疏松活性。體重及各臟器系數(shù)檢測(cè)結(jié)果表明仙茅多糖能有效抑制雌性大鼠切除卵巢導(dǎo)致的體重增加趨勢(shì);多糖CO70和CO90對(duì)去卵巢大鼠的子宮萎縮情況有一定的改善作用;多糖CO50、CO70、CO90、COB能在一定程度上緩解卵巢摘除對(duì)大鼠臟器的影響,結(jié)果同時(shí)說(shuō)明仙茅多糖在長(zhǎng)期給藥的情況下并未對(duì)大鼠產(chǎn)生毒副作用。骨密度及骨量檢測(cè)結(jié)果表明各部位仙茅多糖均能增加去卵巢大鼠股骨和腰椎骨的骨密度、骨礦物量,其中CO70和CO90的改善效果更好;Elisa檢測(cè)結(jié)果表明仙茅多糖能夠抑制去卵巢大鼠體內(nèi)的骨吸收和骨形成,調(diào)節(jié)血清和尿液中骨代謝生化指標(biāo),調(diào)節(jié)骨代謝趨于正常,其中CO50的效果最為顯著;三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)和壓縮實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明仙茅多糖顯著改善股骨和腰椎骨的生物力學(xué)性能,增加骨強(qiáng)度和骨韌性,降低骨折風(fēng)險(xiǎn),各給藥組的股骨韌度均恢復(fù)到了正常范圍,其中CO70和CO90的效果與陽(yáng)性藥相當(dāng);Micro-CT掃描及三維重建結(jié)果表明仙茅多糖顯著修復(fù)股骨和腰椎骨骨小梁微觀結(jié)構(gòu),增加骨小梁數(shù)量、骨小梁厚度,降低骨小梁分離度,改善結(jié)構(gòu)模型指數(shù),逆轉(zhuǎn)模型大鼠骨微結(jié)構(gòu)的退變,其中CO70和CO90的效果優(yōu)于雌二醇。綜合上述結(jié)果,四個(gè)仙茅多糖均具有治療去卵巢模型大鼠骨質(zhì)疏松癥的作用,且CO70和CO90的效果最為顯著。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R284;R285.5
【圖文】：

棍合單糖標(biāo)準(zhǔn)品的PMP柱前衍生化產(chǎn)物HPLC分析圖譜

CO50的PMP柱前衍生化產(chǎn)物HPLC分析圖譜

090的PMP柱前衍生化產(chǎn)物HPLC分析圖譜

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2795767